从茶叶中提取茶多酚的工艺技术研究

　　【摘要】茶多酚又叫茶单宁、茶鞣质，是决定茶汤滋味、颜色的主体成分，它的药用价值很高，具有抗氧化、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抑菌等药理作用。在本文中将采用沸水浸提法及传统有机溶剂提取法等不同提取方法，并用酒石酸亚铁作显色剂，测定茶多酚的含量。 　　【关键词】茶叶；茶多酚；酒石酸亚铁 　　 　　一、试验方法 　　吸取适量茶多酚标准溶液于25mL比色管中，然后依次加入4mL水和酒石酸亚铁溶液5mL，充分混合，加pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液定容至刻度，摇匀，放置20min，以试剂空白为参比，用1cm比色皿在545nm处测定吸光度。 　　二、结果与讨论 　　1.最大吸收波长的选择 　　取1.0mL茶多酚标准溶液，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，波长在470～590nm范围扫描吸收光谱，每隔10nm测一次吸光度，在最大吸收峰附近，每隔5nm测一次吸光度A，可知络合物的最大吸收波长为545nm。 　　2.反应温度的影响 　　温度对配合物的形成影响很显著，当反应温度高于30℃时吸光度变化比较大，因此本试验应在室温条件下进行。 　　3.反应时间的影响 　　取1.0mL茶多酚标准溶液，按试验方法操作，用1cm比色皿，以试剂空白为参比，依次测量放置5，10，20，30，60，……，120min，在选择波长下测定吸光度A值，结果表明络合物在显色55min后吸光度变化较大。 　　4.缓冲体系及pH值的影响 　　使用不同pH值缓冲体系进行试验，结果表明溶液在pH值为7.5时的吸光度较大且基本不变，试验选用pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液。 　　5.酒石酸亚铁的用量 　　仅改变酒石酸亚铁的用量，按试验方法配制系列溶液，酒石酸亚铁在5.0mL吸光度较大且较稳定，选用加入酒石酸亚铁量为5.0mL。 　　6.线性关系考察 　　在25mL比色管中依次加入0，0.5，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5mL茶多酚标准溶液，按试验方法处理后进行测定，其线性回归方程为：A=7.67939c+0.00513，R=0.9997，结果表明，茶多酚在0.00～0.09mg・mL－1范围内，吸光度与质量浓度呈良好的线性关系。 　　7.干扰性试验 　　（1）抗坏血酸、蔗糖和氨基酸干扰性试验。茶叶中的抗坏血酸，蔗糖和氨基酸可能对测定产生影响，经用茶叶内所含纯品验证：对于质量浓度为0.02mg/mL的茶多酚标准溶液，同倍的抗坏血酸，3倍的氨基酸，3倍的蔗糖对测定无干扰，一般情况下茶叶中的抗坏血酸，氨基酸和蔗糖的含量均小于此值，可以不考虑其干扰。 　　（2）咖啡因干扰性试验。取茶汤滤液20mL装于125mL的分液漏斗中，加入10mL四氯化碳，振荡2min，进行咖啡因萃取，分出四氯化碳层，如此操作2次，弃去四氯化碳层．取剩余液1.0mL于25mL比色管中，按试验方法加入试剂，测定吸光度，平行3次，平均吸光度A为0.355，没有除咖啡因时平均吸光度A为0.358．因此本试验可以不考虑咖啡因的干扰。 　　三、样品的测定 　　1.茶汤的制备 　　（1）沸水浸提法。分别准确称取1.5g磨碎试样3份于250mL锥形瓶中，加沸蒸馏水225mL，立即移人沸水浴中，浸提45min（每隔10min摇动1次）．浸提完毕后立即趁热减压过滤（加0.45μm滤膜）。滤液移入250mL容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2次，并将滤液移入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度。 　　（2）茶多酚含量的测定。吸取茶汤试液1.0mL于25mL比色管中，然后依次加入4mL水和5mL酒石酸亚铁溶液，充分混合，再加pH值为7.5的磷酸盐缓冲溶液定容至刻度，摇匀，以试剂空白为参比，测定溶液在545nm处的吸光度。试验结果：沸水浸提法提取样品中茶多酚质量分数为20.62%。 　　（3）加标回收试验。准确移取4号样品1mL，分别加入不同质量浓度的茶多酚标准品，按照2.6试验方法测定，每种样品平行测定5次，其吸光度加标前A=0.372，加标后A=0.378，根据回收率公式计算出回收率，结果测得加标回收率为98.40%，RSD为1.31%，采用本方法对茶叶茶多酚进行定量分析是可行的，结果稳定可靠．加标回收率计算公式：（加标试样测定值－试样测定值）/加标量×100%。 　　2.乙酸乙酯提取法 　　称取经过磨碎的干茶叶沫1.5001g放入250mL锥形瓶，加入225mL90℃水中搅拌浸提45min（每隔10min摇1次），过滤，滤液移入125mL分液漏斗，先后用15mL的乙酸乙酯萃取3次，合并3次有机相于烧杯中，并用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏（77℃），除去乙酸乙酯溶剂得白色粉末状茶多酚，称量为0.0302g，提取率为2.01%。 　　四、结语 　　茶多酚的最大吸收波长为545nm，茶多酚在0.00～0.09mg・mL－1范围内，吸光度与质量浓度呈良好的线性关系。试验结果表明，同等条件下，超声波法具有省时、成本低、操作简便、提取率高、氧化损耗小、产品纯度高等优点，提取的效果优于沸水浸提法和传统有机溶剂法。 　　参考文献： 　　[1]张素霞，魏秋红.不同方法提取茶多酚的比较研究[J].中国食品添加剂，2009（04） 　　[2]何健，印伟.茶叶中茶多酚的提取工艺及其含量测定[J].中国药业，2011（13） 　　[3]李大刚，袁淑芳，吴鸿庚.茶多酚提取纯化工艺比较分析[J].黎明职业大学学报，2011（02）