血清学方法在几种猪病毒抗体检测中的应用进展
血清学方法在几种猪病毒抗体检测中的应用进展 随着养猪业的发展,猪群的密度越来越大,导致猪病越来越错综复杂,而在多重感染的疾病中,80%是病毒病,病毒性疾病已占据首要位置。因此,对病毒病的诊断变得尤为重要。病毒性病原的常规诊断方法有病毒分离、电镜观察、核酸探针、聚合酶链式反应、血清学等方法。而目前临床上最为常用的方法就是血清学检测技术,血清抗体的检测对于疾病诊断、免疫效果的评估和免疫时机的选择等具有重要意义,对于建立猪场的基准线、建立疾病预警系统也非常重要。本文就血清学的类型及血清学方法在猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、圆环病毒、细小病毒、口蹄疫等病毒抗体检测中的应用进展做一综述。 1血清学检测技术
1.1检测原理
病原微生物(病毒、细菌及其他微生物)均可以刺激机体产生相应的抗体,这种抗体与其相应的抗原能够发生特异性反应,血清学方法就是建立在这特异性反应基础上的检测技术。
1.2类型
主要有凝集试验(包括间接凝集、直接凝集),沉淀试验(包括絮状沉淀试验、琼脂扩散试验、免疫电泳),补体结合反应、中和试验、免疫标记抗体反应(包括荧光抗体、酶标抗体、放射性标记抗体、发光标记抗体等)。
2血清学方法在猪病毒抗体检测中的应用
2.1猪瘟
猪瘟病毒抗体检测方法主要有正向间接血凝试验(IHA ),间接ELISA 、Dot-ELISA 、胶体金免疫层析试纸条(GICA )、琼脂扩散试验(GDP )等。马超英应用四种方法分别对142份猪血清样品检测,结果显示,间接ELISA 灵敏性最高,IHA 法对血清要求高,灵敏性稍低,Dot-ELISA 与GICA 操作简单,但灵敏性最低。方先珍等用三种方法对65份猪血清样品检测,结果表明,间接ELISA 和IHA 的符合率为89.23%,而间接ELISA 与阻断ELISA 的符合率为47.69%,IHA 与阻断ELISA 的符合率为50.77%,这与其检测血清抗体的类型不同有关。
2.2猪繁殖与呼吸综合征
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV )抗体检测方法有免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA ),ELISA 、GICA 等。WensvoortG 等首次建立起PRRSV 血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA )检测方法,至今是欧洲许多国家使用的血清学诊断方法。IPMA 不仅能够检测病毒抗原,也可检测病毒抗体。ELISA 作为目前普遍应用的免疫检测技术,可用于检测PRRSV 抗体,主要通过S/P值分析猪群抗体水平的稳定性及猪群的健康状况。王刚等1996
年通过细胞培养PRRSV ,利用NC 膜作为载体,成果建立起检测PRRSV 抗体的Dot-ElISA 。据报道,国产ELISA 试剂盒在PRRSV 感染后8天内可检出感染抗体,比国外的试剂盒提前10天,具有较高的可靠性。
2.3伪狂犬
伪狂犬病毒(PRV )抗体检测法有ELISA 、GICA 法、乳胶凝集试验(LAT )等。gE-ELISA 是一种灵敏度很高的ELISA ,它是根据疫苗株缺失的糖蛋白构建的一种鉴别ELISA 。由于涉及全病毒,因此存在一定的安全隐患,Kimman 等于1996年改进此法建立起一种间接双抗夹心gE-ELISA 。黄骏明等应用混合纤维素酯微孔滤膜作为固相支持物建立了Dot-ELISA ,而中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研制的Dot-ELISA 试剂盒已经投入使用。王生育等应用ELISA 试剂盒与GICA 两种方法对64份猪血清样品进行伪狂犬病毒抗体检测,结果表明两种方法检测的抗体阳性率均为62.5%,两种方法都具有微量、特异、准确的优点。LAT 利用抗原抗体特异性结合的性质,根据能否发生凝集反应来判定是否存在伪狂犬病毒感染,市面上已有LAT 试剂盒销售。
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