a-淀粉酶对淀粉水解作用的观察
实验 a-淀粉酶对淀粉水解作用的观察
一、实验原理:
a-淀粉酶(EC 3.2.1.1)是一种内切淀粉酶,可将淀粉链水解为不同长度的多聚葡萄糖。随着降解时间延续,多聚糖链不断变短,最终生成不同聚合度的寡聚糖和分支低聚糖的混合物。直链淀粉遇碘变蓝色,不同降解度的淀粉,谓之糊精。其与碘呈色各异。a-淀粉酶降解直链淀粉过程如下:
水解过程:淀粉→蓝糊精→红糊精→无色糊精→麦芽糖→葡萄糖 (蓝色)(蓝色)(红色) (无色)
a-淀粉酶水解淀粉的终产物约1/3是G1~G6;37.5%是G7~G12;其余是分子更大一些的低聚糊精。后两类产物包括各种分支糊精,即a-糊精。工业用酶需Ca2+,一般反应温度70℃以上,pH6~7。
二、实验步骤
1
70℃水浴→每过2-3min(统一为2min)→吸取反应液5滴于点滴板小穴中→加0.5%碘液1滴,混匀→观察。
2、 反应温度对a-淀粉酶的影响:
每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至生成无色糊精为止。(控制酶量,以控制反应能在15min~20min完成为宜。)
提问:为什么要保温10min再加入酶液?为什么要间隔1min再加入?
3
每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至生成无色糊精为止。
4、 Ca2+对a-淀粉酶的影响:
准备:1支试管→加a-淀粉酶2mL→加0.1 mol /L EDTA 0.2 mL→摇匀→得去Ca2+ 酶液
每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至加酶液一管生成无色糊精为止。
三、根据实验现象,分析整理实验结论。
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