检验科SOP文件-纤维蛋白原凝结时间测定

纤维蛋白原测定（Clauss法）的原理：凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体，纤维蛋白。当凝血酶浓度较高（约为 100NIH/ml）且纤维蛋白原浓度较低（0.05—0.8g/L）时该反应决定于纤维蛋白原浓度。如在双对数坐标纸上画点，凝血酶凝块时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。

一、项目名称:

纤维蛋白原凝结时间测定（Fibrinogen coagulative time, FIB）

二、检验方法名称：

凝结法

三、方法学原理：

在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后，加入试剂。加入试剂后，采用波长为660nm的光照射样本。凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。从散射光光强度的测定，可以做出凝血曲线，通过Percentage Detection Method方法求得凝血时间。

四、方法学溯源：

纤维蛋白原测定（Clauss法）原理：凝血酶将可溶性的血浆蛋白纤维蛋白原转化为不溶性的多聚体，纤维蛋白。当凝血酶浓度较高（约为 100NIH/ml）且纤维蛋白原浓度较低（0.05—0.8g/L）时该反应决定于纤维蛋白原浓度。如在双对数坐标纸上画点，凝血酶凝块时间与纤维蛋白原浓度相比较呈线形关系。

五、仪器：

（一）型号：Sysmex  CA—1500自动血液凝血分析仪

（二）分析和计算参数：

1．处理量：约120个测试/小时

2．所需样本量：10μl

3．检验时间：在最长检验时间之内测出结果，典型最长检验时间：100秒

4．重复性：CV≤4%

5.  计算参数：纤维蛋白原浓度（Fbg）

六、试剂及配套品：

（一）试剂：

1. 凝血酶试剂（Thrombin Reagent）

（1）商标：德灵（DADE BEHRING）

（2）包装规格：Pack for 10×1ml

（3）代码：B4233 G25 E0533 (961) W

（4）成分：牛凝血酶冻干粉（lyophilized preparation of bovine thrombin）（近似100 NIH units/ml）

2．佛罗那巴比妥缓冲液（Dade Owren'S  Veronal Buffer）

（1）商标：德灵（DADE BEHRING）

（2）包装规格：Pack for 10×10ml

（3）代码：B4234-25

（4）成分：

1）2.84×10­²M的巴比妥钠 (sodium barbital)

2）1.25×10­¹M的氯化钠 (sodium chloride)

3)  PH 7.35±0.1

3. 清洗液（Cleaning）

2%次氯酸钠溶液（自配）

（二）配套品：

1.标准血浆（Standard Human Plasma）

(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）

(2) 代码：No. ORKL

2.校准质控血浆（Ci-Trol）

(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）

(2) 代码：Level 1, B4244-10

Level 2, B4244-20

Level 3, B4244-30

3.质控血浆（Control Plasma）

(1) 商标：太平洋（Pacific Hemostasis）

(2) 代码及规格：Level 1 (Normal), 100595  10×1ml

Level 2 (Abnormal), 100596  10×1ml

Level 3 (Abnormal), 100597  10×1ml

七、操作步骤：

（一） 开机：开机前，先打开连机的打印机。按下机器右边的POWER按钮。开机后机器进行自检，当屏幕上边显示“Ready”时可以进行试验。

（二）洗针：在主屏幕上选“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行洗针。

（三）准备试剂：按照仪器试剂位置程序要求，把每一项的试剂准备好，放在相应的位置。（注：FIB试剂的配制：在冻干粉试剂瓶中加入1ml的蒸馏水，放置室温30min。）

（四）准备标本：将室内质控和离心好的样本放在相应的样本架上（一个架子可放10个样本），准备好放在进样器上。

（五）准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子，查看反应杯是否够量，需及时添加。

（六）输入试验项目：按下主菜单上的“Work List”键，在试验项目键点击Fbg，使Fbg键由“—”变为“O”。如有需要按屏幕下的“Repeat” 键，仪器会自动重复十个样本的检测项目与第一个样本相同。屏幕右边的光标移动键，按下“NEXT”表示翻到下一个界面，按“↑”表示向上移动光标，“←或 →”表示下一个界面试验项目。

（七）输入样本号：按下“ID No.Entry”，按顺序输入样本的序号或病人的病历号。

（八）开始检测：待一切准备工作就绪，按下仪器右上角“START”键，仪器开始工作。

（九）查看结果：返回主屏幕，检测的项目如果由“◎”变为“●”表明此试验已经完成，然后按下“Stored Date”（储存结果）键，屏幕会换到结果显示界面，检测的结果会自动传输到此画面，如果查看反应趋势图，按下边第一个菜单“Graph”，查看凝集趋势、吸光度、结果等。

（十）洗针：当做完一批标本以后，需要洗针，按下“Rinse Probe”，然后按下“Execute”进行洗针。

（十一）关机：回到主屏幕下，在洗完针以后方可关机，切断电源，关闭打印机。

八、 参考范围：FIB ：5—11s

Fbg ：2—4g/L

九、 临床意义：

（一）Fbg减少见于：

先天性低（无）纤维蛋白原血症、严重肝脏疾病、原发性纤维蛋白溶解、DIC、异常纤维蛋白原血症、新生儿及早产儿、某些产科意外、恶性肿瘤等。

（二）Fbg增高见于：

各种血栓前状态及血栓栓塞病、月经期及妊娠期、糖尿病、动脉硬化、结缔组织病、手术后、休克、癌肿、骨髓瘤、放射治疗后等。

十、病人准备和标本要求：

（一）采血时，首先应该确认病人姓名，并且将姓名和编号写在真空采血管的标签处。

（二）尽可能保证每次采血都在同样的条件下进行，即病人处于休息状态，并且在早餐前采血。

（三）凝血实验标本最好不与其它实验一起采集，否则由于标本的分配、分装等而使血液停留在针管的时间延长。

（二）取血时，病人应松弛，环境温暖，防止静脉痉挛，止血带的压力应尽可能小，取血速度平稳顺利，防止产生气泡。

（三）用定量为3毫升的一次性枸橼酸钠（0.11mol/L）真空采血管采血至指定刻度，取血完毕立即轻轻颠倒混均混合均匀，不要剧烈震荡，并避免产生气泡。

（四）及时离心，3000转/分离心标本10分钟，以除去血小板。

（五）务必于采血后2小时内测定完毕,如不能完成试验，冷冻贮存少量血浆（0.5—1ml）（最好在-70℃，或者当贮存时间较短时，可以置于-20℃条件下），在实验前将血浆于37℃下快速融化。血浆用塑料管存放，并用塑料吸管移取标本。

十一、操作注意事项：

（一） 许多的实验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及PH值上很小的变化都会导致试验结果明显的变化。孵育时间与温度是凝血酶原时间测定时应严格控制的参数。血浆绝不能在37°C下放置10min。

（二） 实验前应检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血或出现凝块。

十二、编写者：

日  期：

十三、科主任签字：

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