高通量测序技术在分子生物学中的应用_张春兰

第１２卷第６期　　　　　　　　　　　　　　　　潍坊学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．１２Ｎｏ．６２月　　　　　　　　　　　　　　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＷｅｉｆａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅｃ．２０１２２０１２年１　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｄｇｙ　

高通量测序技术在分子生物学中的应用

张春兰

（）潍坊学院，山东　潍坊　２６１０６１

＊

摘　要：分子生物学的发展离不开测序技术的发展。高通量测序技术被誉为第二代测序技术，相对于具有通量高、速度快、费用低等特点。本文从三个水平介绍了高通量测序技术的应Ｓａｎｅｒ测序技术而言，ｇ

包括在基因组水平的重测序、从头测序和宏基因组测序，在Ｒ用，ＮＡ水平的转录组测序和小分子ＲＮＡ测序，以及在表观遗传学方面的ＤＮＡ甲基化研究和转录因子结合位点研究。

关键词：分子生物学；高通量测序；基因组；转录组；表观遗传学

（）中图分类号：Ｑ７５２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７１—４２８８２０１２０６—００２８－０４

第一代测序技术是Ｓ在过去的３ａｎｅｒ等于１９７０年代发明的双脱氧测序法，０多年中一直在ＤＮＡ测ｇ序领域占据着主要地位。高通量测序技术又称为深度测序技术、新一代测序技术或第二代测序技术。新一代测序技术可通过聚合酶或连接酶进行体外合成测序。相对于传统的Ｓ具有通量更ａｎｅｒ测序技术，ｇ运行时间更短、测序片段更长、花费更少等优点。高通量测序技术的迅猛发展，将生物学在基因水平的高、

研究带入了一个新的时期。高通量测序技术不仅可以进行大规模基因组测序，还可用于基因表达分析、非编码小分子Ｒ表观遗传学分析等相关研究。ＮＡ分析、１　高通量测序技术在ＤＮＡ水平的应用１．１　未知基因组序列的全基因组从头测序

全基因组测序对全面了解一个物种的分子进化、基因组成和基因调控等有着非常重要的意义。新一越来越多的物种基因组信息相继公布。全基因组代测序技术极大地推动了各物种的全基因组测序工作，

从头测序指利用测序平台对某物种进行测序，然后从头组装数据，与数据库比对统计进行基因作图、与性状的关联分析、不同组织或材料间基因差异表达分析等，并最终完成基因组作图。Ｌｉ等首次在动物方面完全运用高通量测序技术模式完成了大熊猫基因组从头测序的组装，测序深度达７覆盖约９３倍，４％的基因

１］

。Ｒ组装形成了大熊猫的基因组草图［组区域，ａｓｍｕｓｓｅ等从４０００年前爱斯基摩托人的一束头发中提取［］

利用Ｓ得到大约７ＤＮＡ，ｏｌｅｘａ进行全基因组测序，９％的序列２。Ｄａｌｌｏｕｌ等联合多个测序平台（４５４测序平台完成５倍测序深度、完成ＩｌｌｕｍｉｎａＧＡⅡ测序平台完成２０倍测序深度、Ｓａｎｅｒ技术完成６倍覆盖度）　ｇ３］

。了火鸡基因组的从头测序［父母及其孩子）进行研究，发现了影Ｊａｒｅｄ等利用全基因组测序对一家四口（４］

。到目前为止，响人类自发性基因突变的平均速度，以及一些与影响兄弟姐妹疾病有关的基因［ＮＣＢＩ上

公布的已测序物种有人、小鼠、大鼠、牛等１拟南芥、水稻、大豆、隐藻４种植物以及其他真菌和原９种动物，生生物。

１．２　已知基因组序列的重测序

可以将测对已知基因组物种进行重测序是第二代测序技术目前应用最为广泛的领域。通过重测序，序数据与已有基因组信息相比对，发现基因结构变异、单核苷酸多态性、群体多态性、突变热点等，从而进行辅助分子育种、遗传进化分析及重要性状候选基因预测等。中科院上海生命中科学院、北京基因组所等六家科研机构共同对１第一次利用全基因组重测序筛选水稻Ｓ对５０个水稻ＲＩＬ系进行重测序，ＮＰ位点，

［］

群体进行表达差异分析，发现了１２２万多个ＳＮＰｓ５。Ｒｕｂｉｎ等通过全基因组重测序对８个家鸡品系和１

，个野生品系进行测序，分析鸡驯养过程中的位点选择，发现了７约１０００多万个ＳＮＰｓ３００多个插入／缺失

２０１２－０６－２０＊收稿日期：

，作者简介：张春兰（女，内蒙古兴和人，潍坊学院生物与农业工程学院讲师，在读博士。１９７４—）

—２８—

第６期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　张春兰：高通量测序技术在分子生物学中的应用

６］

。利用对不同条件下或不同表型的样本进行重测序，位点［也可在个体或群体水平进行差异性分析、遗传

平均每天吸烟２将疾病分析等。Ｗｉｌｌｉａｍ等对一名烟龄超过１５年，５根的原发性肺部肿瘤患者进行分析，该患者的癌组织与相邻正常组织的基因组进行测序，发现了超过５万个基因点突变，并且确认有３９２个在

７］

。编码区域［

１．３　宏基因组学研究

）宏基因组学（测序是近年来提出的一种新概念，目前主要用于微生物的研究中。是Ｍｅｔａ－Ｇｅｎｏｍｉｃｓ指直接从环境中提取所有物种的Ｄ而是从整体上研究整个微ＮＡ进行全基因组测序。即不再进行分离，生物种群结构的特征，研究对象从单一基因组发展到基因组集合。与传统的微生物研究相比，宏基因组不更真实地接近于大自然生态群落和复杂性和多样性，对人类更好地了解微生物群落再局限于实验室培养，有着重要的意义。

２　高通量测序技术在ＲＮＡ水平的应用）２．１　转录组测序（ＲＮＡ－ｓｅｑ

从而全面快速地获得该ＲＮＡ－Ｓｅｑ技术能够在单核苷酸水平对特定物种的整体转录活动进行检测，

物种在某一状态下的几乎所有转录本信息。由于转录组测序可以得到全部Ｒ加ＮＡ转录本的丰度信息，之准确度又高，使得它具有十分广泛的应用领域。主要应用于：

（）检测新的转录本。Ｍ与绵羊基１ａｒｔｅｎＪｅｒ等比较了绵羊的正常组和骨延迟愈合组的基因表达谱，　ｇ

［］

与牛基因因组比对后发现了１２４３１个新的转录本８。ＨｕａｎＷ等比较了不同发育时期牛胚胎的转录本，ｇ　

［］

组比较后发现了１７８５个新的转录本９。

（）基因转录水平研究，如基因表达量、不同样本间差异表达。李新建在其博士论文中比较了荣昌猪２

［０］

。和长白猪的转录本，筛选出１５９６个差异表达显著的基因１

（）基因功能注释。将所测ｒ如ＧＯ、已注释功能的基因相比对分析，从而３ｅａｄｓ与已有数据库（ＫＥＧＧ）

揭示特定转录状态下的基因的功能和生物通路等。ＡａｉＫ等采用４５４测序平台对牛角癌组织和正常角组　ｊ

［１］

。织转录本分析，并对９０９３４５个转录本进行了ＧＯ和ＫＥＧＧ分析１

（）转录本结构变异研究，如可变剪接、基因融合等。转录本结构的变异能揭示基因转录４ＲＮＡ编辑、

从而翻译成不同的蛋白。Ｓ后表达的多样性。可变剪接使一个基因产生多个ｍＲＮＡ转录本，ｅｒｅｉＡ等对　ｇ

［２］

。Ｒ拟南芥的ＲＮＡ－Ｓｅ２％含有内含子的基因进行了可变剪切１ＮＡ编辑通过碱基ｑ分析发现至少有约４

的替换或转换等使基因序列发生改变。ＰｅｎＺＹ等通过对一个汉族男性约７６７００万个转录表达序列分　ｇ　析，发现在２内含子、非翻译区和蛋白编码基因的编码序列中存在Ｒ为后２６８８个在非编码基因、ＮＡ编辑，

［３］

。基因融合是最近利用转录组高通量测序研究的一个期的实验制作了一个综合性的ＲＮＡ编辑组图谱１

主要在肿瘤组织中发现。Ｓ新的内容，ｈａｎｃｈｅｎＲｅｎ等对１４个中国汉族人的原发性前列腺癌和他们的正ｇ　常组织进行Ｒ揭示前列腺癌的基因融合、长非编码Ｒ可变剪切和体细胞突变的多样ＮＡ－ｓｅＮＡ、ｑ分析，

１４］

。性［

）。Ｓ（开发Ｓ寻找潜在的Ｓ５ＮＰｓ和ＳＳＲ等。通过比对转录本和参考基因组间的序列，ＮＰｓ或ＳＳＲｓｔｅ－

开发了９编ｈｅｎＢ等对ＨａＭａ０个欧洲后代进行了转录组测序分析，０１个人基因组上的的ｃＳＮＰ（　ｐｐｐ中６

［１５］

。Ａ开发了３码ＳＮＰ）ｎｅｌａＣａ′ｎｏｖａｓ等对荷斯坦奶牛乳样品进行转录组分析，３０４５个具有多态性的　ｇ

［６］。ｃＳＮＰｓ１

２．２　小分子ＲＮＡ测序

近年来研究发现小分子ＲＮＡ是一类主要存在于真核生物体内的特殊的内源性调控序列。长度范围，进化上高度保守。目前认为主要通过与靶基因配对结合抑制基因翻译，或影响基因的降解来在１８－２７ｎｔ

１７］

，），调控基因表达。自从１中被发现以来［人们越来越意识９９３年首次在秀丽线虫（Ｃａｅｎｏｒｈａｄｉｔｓｅｌｅａｎｓｇ

／到小分子ＲＮＡ的重要作用。人们开始采用大规模平行标签测序技术、４５４－ＦＬＸ、ＳｏｌｅｘａＩｌｌｕｍｉｎａ测序技术为代表的新型焦磷酸高通量测序技术来发掘生物体内的大量小分子ＲＮＡ。并随着技术的逐渐升级，使得测序深度更深、费用更低、速度更快。高通量测序既能捕捉到真实存在的小Ｒ甚至是体内表达量ＮＡ，很低的小Ｒ同时也能对没有注释的小片段ＲＮＡ，ＮＡ进行预测。

—２９—

潍坊学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０１２年１２月

３　表观遗传学研究３．１　甲基化研究

ＤＮＡ甲基化是基因表达调控的另一种广泛而重要的方式。它通过改变染色质结构、ＤＮＡ稳定性及

从而控制基因的表达。对甲基化位点及方式的研究，近年来也发展了多种方法，ＤＮＡ与蛋白质相互作用，

如甲基转移酶法、免疫化学法、氯乙醛法、直接测序法、甲基化特异性的ＰＣＲ法、ＤＮＡ微阵列法等。利用高通量测序法在全基因组范围内检测甲基化位点是近年来发展起来的一种方法。目前已建立了至少三种

［８］

、依赖于高通量测序的Ｄ甲基化Ｄ甲基结合蛋白测序和亚硫ＮＡ甲基化分析技术：ＮＡ免疫共沉淀测序１１９］１９］２０］２１］

。高通量测序已应用于拟南芥［、、酸氢盐测序［水稻［人［等生物Ｄ取得了丰硕ＮＡ甲基化的研究，

的成果，并逐步应用于各种生物体上。３．２　转录因子结合位点研究

转录因子通过与Ｄ开启或关闭基因的表达以达到调控基因表达目的。染色质ＮＡ特定区域相结合，，免疫共沉淀（是目前研究体内蛋白质与ＤｃｈｒｏｍａｔｉｎｉｍｍｕｎｏｒｅｃｉｉｔａｔｉｏｎａｓｓａＣｈＩＰ）ＮＡ相互作用的最　　ｐｐｙ广泛应用于组蛋白修饰、特定转录因子的基因调控作用等相关领域。其基本原理为经典的一种实验技术，

是在活细胞状态下固定蛋白质－Ｄ并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后ＮＡ复合物，通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的Ｄ通过对目的片断的纯化与检ＮＡ片段，测，从而获得蛋白质与ＤＮＡ相互作用的信息。自从２００７年应用该技术获得的科研成果分别在Ｓｃｉ－

［２］［３］［４］

、和Ｃ等顶级刊物上发表以来，利用该技术揭示蛋白因子作用位点的文章如雨后春ｅｎｃｅ２Ｎａｔｕｒｅ２ｅｌｌ２笋般出现在各种刊物和杂志上。

４　结束语

分子生物学的发展离不开测序技术，自从１９７７年Ｓａｎｅｒ测序法的问世到近年来高通量测序法的广ｇ相继揭秘了大量的遗传信息。但是，第二代高通量测序技术还处于起步阶段，由于测序费用仍很泛应用，

昂贵、测序长度也受到限制、信息平台尚未完善等原因，使得该技术的应用受到了一定的限制。相信随着测序技术的逐步改进，高通量测序将成为一项实验室常规手段，为生物学的分子研究带来革命性的变革。—————————————————————

参考文献：

［］［］，（）：１ＬｉＲ，Ｆａｎ　Ｗ，ＴｉａｎＧ，ｅｔａｌ．ＴｈｅｓｅｕｅｎｃｅａｎｄｄｅｎｏｖｏａｓｓｅｍｂｌｏｆｔｈｅｉａｎｔａｎｄａｅｎｏｍｅＪ．Ｎａｔｕｒｅ２０１０，４６３７２７９　　　　　　　　　　　　ｑｙｇｐｇ　３１１－３１７．

［］［］，ｅｎｏｍｅ２ＲａｓｍｕｓｓｅｎＭ，ＬｉＹ，ＬｉｎｄｒｅｅｎＳ，ｅｔａｌ．ＡｎｃｉｅｎｔｈｕｍａｎｓｅｕｅｎｃｅｏｆａｎｅｘｔｉｎｃｔＰａｌａｅｏ－ＥｓｋｉｍｏＪ．Ｎａｔｕｒｅ２０１０，　　　　　　　　　　　ｇｇｑ）：４６３（７２８２７５７－６２．

［］：３Ｄａｌｌｏｕｌ．Ｍｕｌｔｉ－ｐｌａｔｆｏｒｍｎｅｘｔ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｅｕｅｎｃｉｎｏｆｔｈｅｄｏｍｅｓｔｉｃｔｕｒｋｅＭｅｌｅａｒｉｓａｌｌｏａｖｏ）ｅｎｏｍｅａｓｓｅｍｂｌ　　　　　　　ｑｇｙ（ｇｇｐｇｙ　［］，（）：ａｎａｌｓｉｓＪ．ＰＬｏＳＢｉｏｌ２０１０，８９ｅ１００４７５．ａｎｄ　　ｙ

［］４ＲｏａｃｈＪＣ，ＧｌｕｓｍａｎＧ，ＳｍａｉｔＡＦ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｓｉｓｏｆｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅｉｎａｆａｍｉｌｂｗｈｏｌｅ－ｇｅｎｏｍｅｓｅｕｅｎｃｉｎｅｎｅｔｉｃｕａｒｔｅｔ　　　　　　　　　　　　　　ｙｙｙｑｇｇｑ　　［］，）：Ｊ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２０１０，３２８（５９７８６３６－６３９．［］］，ｅｎｏｔｉｎ５ＨｕａｎＸ，ＱｉＦ，ＱｉａｎＱ，ｅｔａｌ．Ｈｉｈ－ｔｈｒｏｕｈｕｔｂｗｈｏｌｅ－ｇｅｎｏｍｅｒｅｓｅｕｅｎｃｉｎＪ．ＧｅｎｏｍｅＲｅｓ２００９，１９　　　　　　ｇｙｐｇｇｇｇｐｙｑｇ［　　　

（）：６１０６８－１０７６．

［］，６ＲｕｂｉｎＣＪＺｏｄＭ　Ｃ，ＥｒｉｋｓｓｏｎＪ．Ｗｈｏｌｅ－ｇｅｎｏｍｅｒｅｓｅｕｅｎｃｉｎｒｅｖｅａｌｓｌｏｃｉｕｎｄｅｒｓｅｌｅｃｔｉｏｎｄｕｒｉｎｃｈｉｃｋｅｎｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ　　　　　　　　　ｙｑｇｇ　　　

［］，（）：Ｊ．Ｎａｔｕｒｅ２０１０，４６４７２８８５８７－５９１．

［］，［］７ＬｅｅＷ，ＪｉａｎＺ，ＬｉｕＪｅｔａｌ．ＴｈｅｍｕｔａｔｉｏｎｓｅｃｔｒｕｍｒｅｖｅａｌｅｄｂａｉｒｅｄｅｎｏｍｅｓｅｕｅｎｃｅｓｆｒｏｍａｌｕｎｃａｎｃｅｒａｔｉｅｎｔＪ．　　　　　　　　　　　　　ｇｐｙｐｇｑｇｐ　　　

，（）：Ｎａｔｕｒｅ２０１０，４５６７２７９４７３－４７９．

［］，８ＪｅｒＭ，ＯｔｔＣＥ，ＧｒüｎｈａｅｎＪｅｔａｌ．ＣｏｍｏｓｉｔｅｔｒａｎｓｃｒｉｔｏｍｅａｓｓｅｍｂｌｏｆＲＮＡ－Ｓｅｄａｔａｉｎａｓｈｅｅｍｏｄｅｌｆｏｒｄｅｌａｅｄ　　　　　　　　　　　　　ｇｇｐｐｙｑｐｙ　　　［］，ｂｏｎｅｈｅａｌｉｎＪ．ＢｍｃＧｅｎｏｍｉｃｓ２０１１，１２：１５８．　　ｇ

［］］，９ＨｕａｎＷ，ＫｈａｔｉｂＨ．ＣｏｍａｒｉｓｏｎｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｔｏｍｉｃｌａｎｄｓｃａｅｓｏｆｂｏｖｉｎｅｅｍｂｒｏｓｕｓｉｎＲＮＡ－ＳｅＪ．ＢｍｃＧｅｎｏｍｉｃｓ　　　　　　　　　ｇ　ｐｐｐｙｇｑ［　（）：２０１０，１１１７１１－７２０．

［］李新建．猪脂肪沉积关键基因筛选及Ｔ陕西：西北农林科技大学，１０ＣＴＰ基因功能研究［Ｃ］．２０１１．

［］，１１ＴｒｉａｔｈｉＡ　Ｋ，ＫｏｒｉｎａＰＧ，ＪａｋｈｅｓａｒａＳＪｅｔａｌ．ＡｒｅｌｉｍｉｎａｒｓｋｅｔｃｈｏｆｈｏｒｎｃａｎｃｅｒｔｒａｎｓｃｒｉｔｏｍｅｉｎＩｎｄｉａｎｚｅｂｕｃａｔｔｌｅ　　　　　　　　　　　　　　　ｐｇｐｙｐ　

—３０—

第６期　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　张春兰：高通量测序技术在分子生物学中的应用

［］，（）：Ｊ．Ｇｅｎｅ２０１２，４９３１１２４－１３１．

［］［］１２ＦｉｌｉｃｈｋｉｎＳＡ，ＰｒｉｅｓｔＨ　Ｄ，ＧｉｖａｎＳＡ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅｍａｉｎｏｆａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｌｉｃｉｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｓｉｓｔｈａｌｉａｎａＪ．　　　　　　　　　　　ｐｐｇｐｇｐ　　

，（）：ＧｅｎｏｍｅＲｅｓｅａｒｃｈ２０１０，２０１４５－５８．　

［］１３ＰｅｎＺＹ，ＣｈｅｎＹＢ，ＴａｎＣ　Ｍ，ｅｔａｌ．ＣｏｍｒｅｈｅｎｓｉｖｅａｎａｌｓｉｓｏｆＲＮＡ－ｓｅｄａｔａｒｅｖｅａｌｓｅｘｔｅｎｓｉｖｅＲＮＡｅｄｉｔｉｎｉｎａｈｕ　　　　　　　　　　　　　－ｇｇｐｙｑｇ　　　　

［］，（）：ｍａｎｔｒａｎｓｃｒｉｔｏｍｅＪ．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏ２０１２，３０３２５３－２６２．　　ｐｇｙ

［］ｒｏｓｔａｔｅｏｕｌａｔｉｏｎ１４ＲｅｎＳ，ＰｅｎＺＹ，ＭａｏＪＨ，ｅｔａｌ．ＲＮＡ－ｓｅａｎａｌｓｉｓｏｆｃａｎｃｅｒｉｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓｒｅｃｕｒｒｅｎｔ　　　　　　　　　　　　　　ｐｐｐｇｑｙ　　

，］，ｅｎｅｆｕｓｉｏｎｓｃａｎｃｅｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｌｏｎｎｏｎｃｏｄｉｎＲＮＡｓａｎｄａｂｅｒｒａｎｔａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｌｉｃｉｎｓ［Ｊ．ＣｅｌｌＲｅｓｅａｒｃｈ２０１２，２２　　　　　　　ｇｇｇｐｇ　　（）：５８０６－８２１．

［］１５ＭｏｎｔｏｍｅｒＳＢ，ＳａｍｍｅｔｈＭ，Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ－ＡｒｃｅｌｕｓＭ，ｅｔａｌ．ＴｒａｎｓｃｒｉｔｏｍｅｕｓｉｎｓｅｃｏｎｄＳｅｕｅｎｃｉｎｅｎｅｔｉｃｓｅｎｅｒａｔｉｏｎ　　　　　　　　ｇｙｐｇｑｇｇｇ　　

［］，（）：ｉｎａＣａｕｃａｓｉａｎＪ．Ｎａｔｕｒｅ２０１０，４６４７２８９７７３－７７７．ｏｕｌａｔｉｏｎ　　　ｐｐ

［］１６ＣáｎｏｖａｓＡ，ＲｉｎｃｏｎＧＩｓｌａｓ－ＴｒｅｏＡ，ｅｔａｌ．ＳＮＰｄｉｓｃｏｖｅｒｉｎｔｈｅｂｏｖｉｎｅｍｉｌｋｔｒａｎｓｃｒｉｔｏｍｅｕｓｉｎＲＮＡ－Ｓｅｔｅｃｈｎｏｌｏ　　　　　　　　　　ｊｙｐｇｑｇｙ　　　

［］，（／）：Ｊ．Ｍａｍｍ　Ｇｅｎｏｍｅ２０１０，２１１１１２５９２－５９８．

［］ｅｎｅ１７ＬｅｅＲＣ，Ｆｅｉｎｂａｕｍ　ＲＬ，ＡｍｂｒｏｓＶ．ＴｈｅＣｅｌｅａｎｓｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｎｉｃｌｉｎ－４ｅｎｃｏｄｅｓｓｍａｌｌＲＮＡｓｗｉｔｈａｎｔｉｓｅｎｓｅｃｏｍ－　　　　　　　　　　　　　　ｇｇ［］，（）：ｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｔｏｌｉｎ－１４Ｊ．Ｃｅｌｌ１９９３，７５５８４３－８５４．　ｐｙ　［］，１８ＤｏｗｎＴ　Ａ，ＲａｋａｎＶ　Ｋ，ＴｕｒｎｅｒＤＪｅｔａｌ．ＡＢａｅｓｉａｎｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｆｏｒｍｍｕｎｏｒｅｃｉｉｔａｔｉｏｎ－ｂａｓｅｄＤＮＡ　　　　　　　　　　ｙｙｇｙｐｐ　

［］，）：ａｎａｌｓｉｓＪ．ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ２００８，２６（７７７９－７８５．ｍｅｔｈｌｏｍｅ　　ｙｙ

［］，ｅｎｏｍｅ１９ＣｏｋｕｓＳＪＦｅｎＳ，ＺｈａｎＸ，ｅｔａｌ．ＳｈｏｔｕｎｂｉｓｕｌｈａｔｅｓｅｕｅｎｃｉｎｏｆｔｈｅＡｒａｂｉｄｏｓｉｓｒｅｖｅａｌｓＤＮＡ　ｍｅｔｈｌａｔｉｏｎ　　　　　　　　　　ｇｇｇｇｐｑｇｐｙ　　　

［］，）：Ｊ．Ｎａｔｕｒｅ２００８，４５２（７１８４２１５－２１９．ａｔｔｅｒｎｉｎｐｇ

［］２０ＹａｎＨ　Ｈ，ＫｉｋｕｃｈｉＳ，ＮｅｕｍａｎｎＰ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅｍａｉｎｏｆｃｔｏｓｉｎｅｍｅｔｈｌａｔｉｏｎｒｅｖｅａｌｅｄｄｎａｍｉｃＤＮＡ　ｍｅｔｈｌａ　　　　　　　　　　－ｐｐｇｙｙｙｙ　

［］，（）：ｔｉｏｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈａｎｄｃｅｎｔｒｏｍｅｒｅｓｉｎｒｉｃｅＪ．ＰｌａｎｔＪ２０１０，６３３３５３－３６５．ａｔｔｅｒｎｓｅｎｅｓ　　　　　　　　　ｐｇ

［］［］２１ＬｉＮ，ＹｅＭ，ＬｉＹ，ｅｔａｌ．ＷｈｏｌｅｅｎｏｍｅＤＮＡ　ｍｅｔｈｌａｔｉｏｎａｎａｌｓｉｓｂａｓｅｄｏｎｈｉｈｔｈｒｏｕｈｕｔｓｅｕｅｎｃｉｎｔｅｃｈｎｏｌｏＪ．　　　　　　　　　　　　ｇｙｙｇｇｐｑｇｇｙ　

，（）：Ｍｅｔｈｏｄｓ２０１０，５２３２０３－２１２．

［］［］，２２ＪｏｈｎｓｏｎＤＳ，ＭｏｒｔａｚａｖｉＡ，ＭｅｒｓＲ　Ｍ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅｍａｉｎｏｆｉｎｖｉｖｏｒｏｔｅｉｎ－ＤＮＡｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓＪ．Ｓｃｉｅｎｃｅ　　　　　　　　　　ｙｐｐｇｐ　

（）：２００７，３１６５８３０１４９７－１５０２．

［］２３ＭｉｋｋｅｌｓｅｎＴＳ，ＫｕＭ，ＪａｆｆｅＤＢ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅｍａｓｏｆｃｈｒｏｍａｔｉｎｓｔａｔｅｉｎａｎｄｌｉｎｅａｅ－ｃｏｍｍｉｔｔｅｄｌｕｒｉｏｔｅｎｔ　　　　　　　　　　　　　　ｐｐｐｇ

［］，（）：ｃｅｌｌｓＪ．Ｎａｔｕｒｅ２００７，４４８７１５３５５３－５６０．

［］［］，２４ＢａｒｓｋｉＡ，ＣｕｄｄａａｈＳ，ＣｕｉＫ，ｅｔａｌ．Ｈｉｈ－ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｒｏｆｉｌｉｎｏｆｈｉｓｔｏｎｅｍｅｔｈｌａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｅｎｏｍｅＪ．Ｃｅｌｌ　　　　　　　　　　　ｐｇｐｇｙｇ　

）：２００７，１２９（４８２３－８３７．

ＴｈｅＡｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｉｈ－ｔｈｒｏｕｈｕｔ　　　ｐｐｇｇｐ

ＳｅｕｅｎｃｉｎＴｅｃｈｎｏｌｏｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏ　　ｑｇｇｙｇｙ　　

ＺＨＡＮＧＣｈｕｎ－ｌａｎ　

（，Ｗ）ＷｅｉｆａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｅｉｆａｎ２６１０６１，Ｃｈｉｎａｇｙｇ　　

：ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｃａｎｎｏｔｂｅｓｅａｒａｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｓｅｕｅｎｃｉｎｔｅｃｈｎｏｌｏ．Ｈｉｈ　　　　　　　　　　　　ｐｇｙｐｐｑｇｇｙｇ　　－ｔｈｒｏｕｈｕｔｓｅｕｅｎｃｉｎｔｅｃｈｎｏｌｏｉｓｋｎｏｗｎａｓｔｈｅｓｅｃｏｎｄ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｅｕｅｎｃｉｎｔｅｃｈｎｏｌｏ．Ｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓａｎｅｒ　　　　　　　　　ｇｐｑｇｇｙｑｇｇｙｐｇ　　　，，，ｓｅｕｅｎｃｉｎｔｅｃｈｎｏｌｏｉｔｉｓｈｉｈ－ｔｈｒｏｕｈｕｔｆａｓｔａｎｄｌｏｗｃｏｓｔｓ．Ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｄｅｓｃｒｉｂｅｓｔｈｅａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｉｈ－　　　　　　　　　　　ｑｇｇｙｇｇｐｐｐｇ　，，ｅｎｏｍｅｓｅｕｅｎｃｉｎｔｅｃｈｎｏｌｏｆｒｏｍｔｈｒｅｅｌｅｖｅｌｓｉｎｃｌｕｄｉｎｌｅｖｅｌｏｆｒｅｓｅｕｅｎｃｉｎｄｅｎｏｖｏｓｅｕｅｎｃｉｎａｎｄｍｅｔｔｈｒｏｕｈｕｔ　　　　　　　　　－ｇｑｇｇｙｇｑｇｑｇｇｐ　　　　，，ａｅｎｏｍｉｃｓｅｕｅｎｃｉｎＲＮＡｌｅｖｅｌｏｆｔｒａｎｓｃｒｉｔｏｍｅｓｅｕｅｎｃｉｎａｎｄｓｍａｌｌＲＮＡｓｅｕｅｎｃｉｎａｎｄｅｉｅｎｅｔｉｃｌｅｖｅｌｏｆＤＮＡ　ｍｅｔｈ　　　　　　　　　　　　－ｇｑｇｐｑｇｑｇｐｇ　ｌａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｂｉｎｄｉｎｓｉｔｅｓ．　　　　ｙｐｇ　

：ｍ，，，，ｅｎｏｍｅＫｅｗｏｒｄｓｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｈｉｈ－ｔｈｒｏｕｈｕｔｓｅｕｅｎｃｉｎｔｒａｎｓｃｒｉｔｏｍｅｅｉｅｎｅｔｉｃ　　ｇｇｙｇｇｐｑｇｐｐｇｙ

（责任编辑：刘乃生）

—３１—