野生型p53调控结肠癌细胞代谢转换的研究

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野生型ｐ５３调控结肠癌细胞代谢转换的

研究

刘亮

陈浩余超然

陶德定冷彦胡俊波龚建平李小兰

【摘要】

目的观察野生型ｐ５３基因在结肠癌细胞系中能量代谢转换中的作用。方法利用

流式细胞学方法检测ｐ５３在结肠癌细胞系ＨＣＴｌ１６中对荧光标记的葡萄糖类似物：２－Ｎ［７－硝基苯－２一乙二酸，３４羟氨基］一２一脱氧葡萄糖（２－ＮＢＤＧ）摄取的影响，进一步采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、实时定量聚合酶链反应（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ）等方法检测其可能的下游调控关键酶三磷酸腺苷（ＡＴＰ）柠檬酸裂解酶（ＡＣＬＹ）、糖酵解的关键酶葡糖糖６．磷酸脱氢酶（ｃ６ＰＤ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨＡ）、醛缩酶（ＡＬＤＯＡ）及Ｍ２型丙酮酸激酶（ＰＫＭ２）的蛋白及转录水平的表达变化。结果

比较于ｐ５３缺失型（ＫＯ）ＨＣＴｌｌ６

细胞，ｐ５３野生型（ＷＴ）的ＨＣＴｌｌ６细胞对葡萄糖的摄取能力下降４ｌ％（Ｐ＜０．０５）。进一步利用

Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测能量代谢关键基因进行蛋白水平的比较及半定量分析后发现，相对于０５３ＫＯ的

ＨＣＴｌｌ６细胞，调控细胞脂质代谢关键酶ＡＣＬＹ下调０．３９８４（ｔ＝７．１５４，Ｐ＜０．０２５）、糖酵解的关键酶Ｇ６ＰＤ下调０．３５７８（ｔ＝１０．９９，Ｐ＜０．０１）、ＬＤＨＡ下调０．２２２７（ｔ＝７．１８２，Ｐ＜０．０５），证明上述基因在ｐ５３可汀细胞中表达受抑制，而另外两个糖酵解关键酶ＡＬＤＯＡ及ＰＫＭ２的表达则无明显变化（Ｐ＞０．０５）。进一步检测ｍＲＮＡ水平后发现ｐ５３ｗＴ的ＨＣＴｌｌ６细胞中ＡＣＬＹ基因下调６．６１倍（ｔ＝４３．１８，Ｐ＜０．０１）、Ｇ６ＰＤ基因下调６．７５倍（ｔ＝８５．９０，Ｐ＜０．０１）及ＬＤＨＡ基因下调０．９９倍（ｔ＝３２．４２，Ｐ＜０．０１），而ＡＬＤＯＡ及ＰＫＭ２则无明显变化（Ｐ＞０．０５）。结论野生型ｐ５３作为抑癌基因参与肿瘤能量代谢的调控过程，其可能通过抑制多种关键酶发挥作用。

【关键词】结肠肿瘤；０５３；能量代谢

Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｗｉｌｄ—ｔｙｐｅ

ｐ５３

ｉｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｍｅｔａｂｏｌｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ

ｃａｎｃｅｒ

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ＬｉｕＬｉａｎｇ，ＣｈｅｎＨａｏ，ＹｕＣｈａｏｒａｎ，ＴａｏＤｅｄｉｎｇ，Ｌｅｎｇ

Ｙａｎ，肌Ｊｕｎｂｏ，ＧｏｎｇＪｍ印ｉｎｇ，Ｌｉ

Ｘｉａｏｌａｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，Ｔｏｎｇｆｉ

Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｏｎｇｆｉ

ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌ—

ｌｅｇｅ，ＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｕｈａｎ４３００３０，Ｃｈｉｎａ

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬｉＸｉａｏｌａｎ．Ｅｍａｉｌ：ｎａｎｃｙ９９９９８＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｒｎ

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ｏｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｐ５３ｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆ

ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＩｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｒｏｌｅｏｆ０５３ｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎｂｙＦｌｏｗ

Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓ．ＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｋｅｙｅｎｚｙｍｅｏｆｍｅｔａｂｏｌｉｃｓｉｇｎａｌｐａｔｈｗａｙｔｈｒｏｕｇｈｕｓｉｎｇＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ

ａｎｄｒｅａｌ—ｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ）ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ

Ｒｅｌａｔｉｖｅｔｏｔｈｅ

ｋｎｏｃｋ—ｏｕｔ（ＫＯ）０５３ＨＣＴｌ１６ｃｅｌｌｓ，ｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｇｌｕｃｏｓｅｕｐｔａｋｅａｐｐｅａｒｅｄｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｂｙ４１ｐｅｒｃｅｎｔ

ｉｎｗｉｌｄ—ｔｙｐｅ（ＷＴ）ｐ５３ＨＣＴｌ１６ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．０５）．ｒＩ＇｝ｌｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｄｅｎｏｓｉｎｅ・ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＡＴＰ）一ｃｉｔｒａｔｅｌｙａｓｅ（ＡＣＬＹ），ｇｌｕｃｏｓｅ一６一ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（Ｇ６ＰＤ）ａｎｄｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎ。

ａｓｅ

Ａ（ＬＤＨＡ）．ｋｅｙ

ｅｎｚｙｍｅｓ

ｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄ０．３９８４，０．３５７８ａｎｄ０．２２２７ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，

ａｓ

ｗｅＩＩｉｎ０５３ＷＴＨＣＴｌｌ６ｃｅｌｌｓ（Ｐ＜０．０２５）．ＴｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡＣＬＹａｎｄＧ６ＰＤｉｎｐ５３ＷＴ

ＨＣＴｌｌ６ｃｅｌｌｓｅｘｈｉｂｉｔｅｄａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙｓｉｘ—ｆｏｌｄｓ（ｔ＝４３．１８，Ｐ＜０．叭）ａｎｄｓｅｖｅｎ—ｆｏｌｄｓ（ｔ＝４３．１８，Ｐ＜０．０１）ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｂｅｓｉｄｅｓ．ｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＬＤＨＡｄｅｃｒｅａｓｅｄａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ

５０％ｉｎｐ５３ＷＴＨＣＴｌ１６

ｃｅｌｌｓ（ｔ＝３２．４２，Ｐ＜０．０１）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｌ－

ｄ０１ａｓｅＡ（ＡＬＤＯＡ）ａｎｄｐｙｒｕｖａｔｅｋｉｎａｓｅＭ２（ＰＫＭ２）ｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｓｅｃｅｌｌｓｓｈｏｗｓｎｏ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＷｉｌｄ—ｔｙｐｅ（ＷＴ）ｐ５３，ａｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅ，ｍａｙｉｎｈｉｂｉｔｍｅｔａｂｏｌｉｃｔｒａｎｓｆｏｒ。

ｍａｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈｓｅｖｅｒａｌｋｅｙｅｎｚｙｍｅｓ．

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｃｏｌｏｎｉｃｎｅｏｐｌａｓｍｓ；ｐ５３；Ｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ

ＤＯＩ：１０．３７６０／ｅｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－９０３０．２０１５．０８．０４６

基金项目：国家自然科学基金资助项目（８１１０１９４３、８１３７２３２４、８１２０１６３８）

作者单位：４３００３０武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所／胃肠外科通信作者：李小兰，Ｅｍａｉｌ：ｎａｎｃｙ９９９９８＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｒｎ

・１９０５・

・实验研究・

史堡塞堕处型盘查！！！！生！旦筮丝鲞筮！塑垦！地』量翌墨！垡：△！趔塾垫！！：！堂：丝，№：！

结直肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，目前在我国的发病率呈不断上升趋势…。ｐ５３基因作为最经典的肿瘤抑癌基因，参与肿瘤多方面调控。最近研究结果显示，肿瘤细胞糖代谢的异常改变对促进肿瘤胞的生长、侵袭和转移具有重要意义，目前作为肿瘤治疗

方向新的靶点越来越被受到重视旧Ｊ。本研究旨在探

５’一ＴｃＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＡＴＩＴｃＡＧＡＧ一３’，下游弓Ｉ物：５’一

ＣＧＡＧＣＡＴＡＣｑｑ＂ＧＡＡＣＣＧＡＴＴＣＴ．３’；Ｇ６ＰＤ上游弓Ｉ物：５’一ＣＧＡＧＧＣＣＧＴＣＡＣＣＡＡＧＡＡＣ一３’，下游引物：５’一ＧＴＡＧＴＧＧＴＣＧＡＴＧＣＧＧＴＡＧＡ－３’；ＬＤＨＡ上游引物：５’一ＡＴＧＧＣＡＡＣＴＣＴＡＡＡＧＧＡＴＣＡＧＣ－３’，下游弓ｌ物：５’一ＣＣＡＡＣＣＣＣＡＡＣＡＡＣＴＧＴＡＡＴＣＴ－３’；ＡＬＤＯＡ上游弓Ｉ物：５’．ＡＴＧＣＣＣＴＡＣＣＡＡＴＡＴＣＣＡＧＣＡ－３’，下游弓Ｉ物：５’一ＧＣＴＣＣＣＡＧＴＧＧＡＣＴＣＡＴＣＴＧ一３’；ＰＫＭ２上游引物：

讨ｐ５３在结肠癌细胞ＨＣＴｌ１６代谢转换中的作用及其可能的分子调控机制。

材料与方法

１．材料：ＨＣＴｌｌ６ｐ５３野生型及缺失型细胞株由本

５’．ＡＴＧＴｃＧＡＡＧｃＣＣＣＡＴＡＧＴＧＡＡ．３’，下游引物：５’一

ＴＧＧＧＴＧＧＴＧＡＡＴＣＡＡＴＧＴＣＣＡ．３’；ＧＡＰＤＨ上游引物：

５’．ＴＧＴＧＧＧＣＡＴＣＡＡＴＧＧＡＴＴＴＧＧ－３’，下游引物：５’一ＡＣＡＣＣＡ７ＩＩＧＴＡｒＩ’Ｉ＇ＣＣＧＧＧＴＣＡＡＴ．３’。按照试剂盒说明

进行Ｒｅａｌ．ｔｉｍｅ

实验室传代所得。细胞常规培养条件为３７℃、５％ＣＯ：，细胞培养采用ＤＭＥＭ培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司）、１０％

ＰＣＲ反应，并用２一枷‘法分析Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ

胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ公司）；ｐ５３、甘油醛－３．磷酸脱氢酶

（ＧＡＰＤＨ）抗体购自ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司；三磷酸腺苷（ＡＴＰ）柠檬酸裂解酶（ＡＣＬＹ）、葡糖糖６一磷酸脱氢酶

（Ｇ６ＰＤ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨＡ）、醛缩酶（ＡＬＤＯＡ）及Ｍ２

ＰＣＲ数据，应用单向方差分析进行各个样本间２一ＡＡｃ‘

的比较。

５．统计学方法：数据以均数±标准差（元－Ｉ－ｓ）表示，

应用ＳＰＳＳ１２．０统计软件分析，采用ｔ检验，以Ｐ＜

型丙酮酸激酶（ＰＫＭ２）抗体均购自Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ公司；

２－脱氧一Ｄ葡萄糖（２ＮＢＤＧ）检测试剂盒购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。

０．０５为差异有统计学意义。

结

果

２．细胞葡萄糖摄取实验：细胞接种于２４孔板正常培养２４ｈ后，换成不含葡萄糖的ＤＭＥＮ培养基（Ｇｉｂｃｏ公司）培养４ｈ后加入１００ｍｍｏＬ／Ｌ２－ＮＢＤＧ作用２

荧光。

３．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ：将ＨＣＴｌｌ６细胞以５×１０５个／孔

ｈ，

１．野生型ｐ５３抑制结肠癌细胞ＨＣＴｌｌ６葡萄糖摄取：采用本实验室所保存的ＨＣＴｌｌ６ｐ５３野生型（ＷＴ）及缺失型（ＫＯ）细胞系（图１），利用２－ＮＢＤＧ检测试剂盒检测两种细胞的葡萄糖摄取能力，发现比较于ｐ５３

缺失型ＨＣＴｌｌ６细胞，ｐ５３野生型ＨＣＴｌｌ６细胞的葡萄

胰酶消化细胞，ＰＢＳ洗２遍后流式细胞仪检测细胞的

糖摄取能力下降４１％（Ｐ＜０．０５．图２）。

种于６孔板，２４ｈ贴壁培养后胰酶消化收集细胞沉淀，

加入适量含苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）的ＮＰ４０裂解液冰上裂解离心后取上清，经二喹啉甲酸（ＢＣＡ）法检测浓度后加人上样缓冲液水浴１００ｃｃ。蛋白样品以每孔３０斗ｌ上样电泳后，硝酸纤维素（ＮＣ）膜转膜２ｈ，并用脱脂牛奶封闭非特异性结合，４℃孵育一抗过夜（ｐ５３抗体浓度为１：５００，ＧＡＰＤＨ、ＡＣＬＹ、Ｇ６ＰＤ、ＡＬＤＯＡ、ＰＫＭ２抗体浓度均为１：１０００，ＬＤＨＡ抗体浓度

１：４

图１

（ｉ＼ｔ＇１）ｌｌ－－

ｌ：野生型；２：缺失型；ＧＡＰＤＨ：甘油醛＿３—磷酸脱氢酶

Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｐ５３野生型及缺失型

ＨＣＴｌｌ６细胞中ｐ５３的表达

ｏｏｏ），ＴＢＳＴ洗膜后孵育二抗，最后用增强化学发

２．ｐ５３对结肠癌ＨＣＴｌ１６细胞能量代谢关键酶蛋

光（ＥＣＬ）法显影。ＩｍａｇｅＪ软件分析目的条带和内参白水平的影响：对肿瘤能量代谢中糖酵解关键酶Ｇ６ＰＤ、ＬＤＨＡ、ＰＫＭ２、ＡＬＤＯＡ及脂肪酸合成关键酶ＡＣＬＹ等基因的蛋白表达水平进行检测，发现ｐ５３野

生型ＨＣＴｌ１６细胞中ＡＣＬＹ、Ｇ６ＰＤ及ＬＤＨＡ等表达均低于ｐ５３缺失型细胞中的表达量，利用ＩｍａｇｅＪ软件进

的灰度值，计算两者的比值即为相对灰度值，比较实验

组和对照组间目的蛋白条带的相对灰度值，即可间接反映蛋白表达水平差异。

４．实时定量聚合酶链反应（Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ）：将ＨＣＴｌｌ６细胞以５×１０５个／孔接种于６孔板，２４ｈ贴壁培养后胰酶消化收集细胞沉淀，利用Ｔｒｉｚｏｌ法提取细

行灰度值分析，进行半定量分析后可见相对于ｐ５３缺

失型（ＫＯ）细胞，ＡＣＬＹ下调０．３９８４（ｔ＝７．１５４，Ｐ＜０．０５）、Ｇ６ＰＤ下调０．３５７８（ｔ＝１０．９９，Ｐ＜０．０１）、ＬＤＨＡ下调０．２２２７（ｔ＝７．１８２，Ｐ＜０．０５）；而ＡＬＤＯＡ

胞ＲＮＡ，按照ＴａＫａＲａ公司的反转录试剂盒说明书操作进行反转录合成ｃＤＮＡ。根据基因序列用ＮＣＢＩＰｒｉｍｅｒ．ＢＬＡＳＴ设计引物，序列如下：ＡＣＬＹ上游引物：

及ＰＫＭ２差异则无统计学意义（Ｐ＞０．０５，图３）。

ｒ乜堡塞堕处型苤查！Ｑ！！生！旦笙丝鲞箜！塑垦！ｉ！』坠ｅ！！坚：垒！耻堕！Ｑ！！：！！！：！！，堂：！

・１９０７・

注：ＷＴ：野生型；ＫＯ：缺失型

圈２

注：ＷＴ：野生型；ＫＯ：缺失型；ＡＣＬＹ：三磷酸腺苷柠檬酸裂

ｐ５３缺失型及野生型ＨＣＴＩ１６细胞葡萄糖摄取率比较

解酶；Ｇ６ＰＤ：葡糖糖６磷酸脱氢酶；ＬＤＨＡ：乳酸脱氢酶；

ＡＬＤＯＡ：醛缩酶；ＰＫＭ２：Ｍ２型丙酮酸激酶；与缺失型比较，

８Ｐ＜０．０１

———－

图４ｐ５３对ＨＣＴｌ１６细胞中能量代谢关键酶ｍＲＮＡ水平的影响

●—ｈ■Ｉ

过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测后发现在ｐ５３野生型细胞中

’■一＇●——，

＇———◆—■—一

ＡＣＬＹ、Ｇ６ＰＤ、ＬＤＨＡ等基因蛋白水平的表达明显低于ｐ５３缺失细胞。其中ＡＣＬＹ是参与脂质代谢的关键酶，参与脂类的从头合成过程旧１；Ｇ６ＰＤ作为磷酸戊糖途径的首个限速酶，参与糖异生及其他生物合成过程Ｈ１；ＬＤＨＡ是糖酵解途径的末端酶，其在多种肿瘤中

表达有上调趋势¨Ｊ。我们分析ｐ５３与ＡＣＬＹ、Ｇ６ＰＤ及

●——■●—－

●—■—＿

醛＿３．磷酸脱氢酶

图３

●—■■———◆

ｗＴ：野生型；ＫＯ：缺失型；ＡＣＬＹ：三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶；Ｇ６ＰＤ：葡糖糖６一磷酸脱氢酶；ＬＤＨＡ：乳酸脱氢酶；ＡＬＤＯＡ：醛缩酶；ＰＫＭ２：Ｍ２型丙酮酸激酶；ＧＡＰＤＨ：甘油

ＬＤＨＡ等基因的转录水平是否存在差异后发现，ｐ５３野生型细胞相较于缺失型细胞中ＡＣＬＹ下降接近６．６１倍、Ｇ６ＰＤ下降６．７５倍、ＬＤＨＡ下降０．９９倍。本研究结果表明野生型ｐ５３可以通过抑制肿瘤能量代谢关键酶ＡＣＬＹ、Ｇ６ＰＤ及ＬＤＨＡ蛋白及ｍＲＮＡ的表达水平调控细胞葡萄糖的摄取能力，与既往研究相符ＨＪ。

本研究结果表明，ｐ５３作为重要的抑癌基因，可能

通过抑制或下调Ｇ６ＰＤ、ＬＤＨＡ及ＡＣＬＹ，从而抑制结

０５３对ＨＣＴＩ１６细胞中能量代谢关键酶蛋白水平的影响

３．ｐ５３对结肠癌ＨＣＴｌｌ６细胞能量代谢关键酶

ｍＲＮＡ水平的影响：利用Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ法检测上述关

直肠癌细胞ＨＣＴｌ１６的葡糖糖摄取，提示ｐ５３在肿瘤能量代谢转化过程中发挥着重要作用。

参考文献

［１］王磊，汪建平．结直肠癌腹膜转移的研究现状及其争议［Ｊ］．中华

实验外科杂志，２０１４，３ｌ（２）：２３４－２３５．

［２］孙洁，孟祥军．肿瘤细胞的异常糖代谢［Ｊ］．国际肿瘤学杂志，

２０１３，４０（１２）：８８３－８８５．

［３］ＬｅｅＪＨ。ＪａｎｇＨ，ＬｅｅＳＭ，ｅｔａ１．ＡＴＰ・ｃｉｔｒａｔｅｌｙｒｅｒｅｇｕｌａｔｅｓｃｅｌｌｕｌａｒｓｅ—

ｎｅ目ｅｅｎｃｅ

键酶的ｍＲＮＡ水平的影响，发现比较于ｐ５３缺失型细胞，ｐ５３野生型细胞ＡＣＬＹ表达下调６．６１倍（ｔ＝４３．１８，Ｐ＜０．０１）、Ｇ６ＰＤ下调６．７５倍（ｔ＝８５．９０，Ｐ＜０．０１）、ＬＤＨＡ下调０．９９倍（ｔ＝３２．４２，Ｐ＜０．０１），差异有统计学意义，而ＡＬＤＯＡ及ＰＫＭ２基因的ｍＲＮＡ水平表达差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５，图４）。

讨

论

ｖｉａ

ａｌｌ

ＡＭＰＫ・ａｎｄｐ５３一ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＦＥＢＳＪ，

２０１５，２８２（２）：３６１－３７１．

［４］Ｊｉａｎｇ

Ｐ，Ｄｕ

Ｗ，ＷａｎｇＸ，ｅｔａ１．ｐ５３ｒｅｇｕｌａｔｅｓｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈｄｉ—

ｏｆｇｌｕｃｏｓｅ－６一ｐｈｏｓｐｈａｔｅ

我们通过比较ＨＣＴｌｌ６ｐ５３野生型与缺失型细胞中葡萄糖摄取率的差异后发现ｐ５３可以抑制肿瘤细胞葡萄糖的摄取能力，提示影响肿瘤细胞糖摄取除肿瘤微环境中的间质细胞外，肿瘤细胞本身的基因型变化也是影响月啦瘤糖摄取能力的重要因素。我们进一步比较参与肿瘤糖代谢及脂质代谢关键酶的基因变化，通

［５］

ｒｅｃｔｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ

ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ［Ｊ］．Ｎａｔ

Ｃｅｌｌ

Ｂｉｏｌ，２０１ｌ，１３（３）：３１０－３１６．

Ｃｈａｖｅｚ—ＰｅｍｚＶＡ，Ｓｔｒａｓｂｅｒｇ—ＲｉｅｂｅｒＭ，ＲｉｅｂｅｒＭ．Ｈｙｐｏｘｉａａｎｄｈｙ・ｐｏｘｉａｍｉｍｅｔｉｃｃｏｏｐｅｒａｔｅｓｔａｒｖａｔｉｏｎ

ｔｏｃｏｕｎｔｅｒａｃｔ

ｔｕｍｏｒｃｅｌｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏ

ｐｒｏ妇ｎｔｉａｌｌｙ

ｇｌｕｃｏｓｅ

ｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｗｉｔｈ

ｍｕｔａｎｔｐ５３『Ｊ］．Ｂｉｏｅｈｅｍ

ＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２０１４，４４３（１）：１２０—１２５．

（收稿日期：２０１５－０４—１２）

野生型p53调控结肠癌细胞代谢转换的研究

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

刘亮， 陈浩， 余超然， 陶德定， 冷彦， 胡俊波， 龚建平， 李小兰华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所/胃肠外科, 武汉,430030中华实验外科杂志

Chinese Journal of Experimental Surgery2015,32(8)

本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zhsywk201508046.aspx