正常成熟破骨细胞原代培养
正常成熟破骨细胞原代培养
实验材料:
1. 细胞来源:新生大鼠或兔,妊娠6个月以内的引产胎儿等;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素,pH7.2;
3. 细胞支持物:薄骨片、盖玻片;
4. 培养液:199培养基、MEM或DMEM培养基均可,须补加15%—20%小牛血清、25mmol/L HEPES及青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml;
实验方法:
1. 薄骨片的制备:取新鲜牛股骨干的密质部分,沿骨纵轴用骨锯切割成大小约0.5cm×0.5CM、厚为0.1cm的小块,再用金刚砂轮磨成厚约10—50μm(以便在相差显微镜下观察)的薄骨片。使用前用超声波清洗仪超声洗涤3次,每次约10min。然后依次浸泡在3个盛有含青霉素(1000IU/ml)、链霉素(1000μg/ml)、两性霉素B(3μg/ml)的抗生素溶液的小容器中,每次10—20min。最后可浸于盛有含抗生素的培养液的容器内,置4℃(短期)或-20℃(较长期)冰箱内保存备用;
2. 取生后3—5d的大鼠,拉颈处死后置于盛有75%酒精的容器中,消毒3—5min后,取出放入培养皿中;
3. 用手术剪剪开其四肢皮肤、肌肉,取股骨和胫骨等长骨,放入盛缓冲液的培养皿中。除去骨表面的软组织、骨膜以及软骨;
4. 将除去骨膜等多余组织后的长骨干部分清洗后,置于盛有少量培养液的培养皿中。用手术刀或手术剪纵行剖开骨干。用手术刀轻刮骨的内表面,同时用尖吸管不断吸取培养皿中的培养液,冲洗骨内表面多次,直至骨内表面变白为止;
5. 用吸管吸打上述含碎骨片及分离细胞的培养液2—5min左右,使附着于碎骨片上的破骨细胞分离脱落于培养液中。静置1—2min后,待碎骨片沉降,收集细胞悬液;
6. 将细胞悬液加入到预置有薄骨片或盖玻片的24孔培养板中,在37℃、5%CO2培养箱中培养;
7. 培养30min左右,取出薄骨片或盖玻片用培养液冲洗以除去未附着的骨髓造血细胞。冲洗后,将薄骨片或盖玻片移入另一培养板中继续培养;
相关文章
- 肝细胞核因子4α(HNF4α)诱导肝细胞功能的体外和体内研究
- 高中生物选修3期中试题
- 畜牧学 第二章 繁殖学
- 高中生物-专题3[胚胎工程]知识点
- 口腔生物学
- 植物生理学考研复习资料
- 选修三基础知识
- 骨髓细胞形态学检查操作流程
- 生物选修3知识点
- 细胞工程试题及答案
肝细胞核因子4诱导肝细胞功能的体外和体内研究 内容摘要 目的: 首先比较不同肝细胞.胚胎干细胞embryonic stem cell,ES以及肝肿瘤细胞.HNF4α基因和肝细胞相关功能基因的表达情况,然后选择HNF4α作为外源目的基因,利用 ...
生物选修三期中试题 一.单项选择题(35*2=70分) 1.想要获得极高产油抗病毒.抗旱.抗寒.抗除草剂等多重优点的农作物,以下哪种方法能做到( ) A 细胞融合技术 B 转基因技术 C 组织培养技术 D 人工诱变 2.下列人体细胞中分化程 ...
第二章 动物繁殖学 内容提要 1. 繁殖生理 阐明生殖过程的现象.规律和机理.包括家畜生殖器官的结构.功能,生殖激素及其在繁殖过程中的一系列生理现象. 2. 繁殖技术 为提高动物繁殖力而采用的一些手段.包括家畜的人工授精.发情鉴定.妊娠诊断 ...
胚胎工程 一.精子与卵细胞发生上的区别与联系 精子的变形: 细胞核----------精子头的主要部分; 高尔基体--------头部的顶体; 中心体----------精子的尾; 线粒体----------聚集在尾的基部形成线粒体鞘膜; ...
生态系(ecosystem ):生物之间,生物与其环境之间的相互关系称生态系. 生态学:(ecology) 研究生物与其环境的相互依赖和相互制约的科学为生态学. 中心原则:生态系建立的中心原则是生物体对其赖以生存环境的适应与改建. 生态连续 ...
<植物生理学>考研复习资料 作者:一泓秋水 一.名词解释部分 一类. 基本概念 1.胞间连丝:是指贯穿细胞壁.胞间层,连接相邻细胞原生质体的管状通道. 2.溶胶:胶粒完全分散在介质中,胶粒之间联系减弱,呈液化的半流动状态,胶粒保 ...
专题1 基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 1.基因工程的原理是 基因工程的概念是指按照人们的愿望(体现基因工程的 定向 性),进行严格的设计, 通过体外 DNA重组 和 转基因 ,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的 ...
骨髓细胞检验 一.骨髓的取材 骨髓取材方式主要有两种,即骨髓穿刺术及环钻术,后者又称骨髓活检.特别适合用于"干抽"情况下且可看到造血组织的天然结构,能判断造血组织与脂肪组织的比例,有助于对再生障碍时病情严重程度的估计,也 ...
生物选修3知识点 专题1 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品.基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工 ...
一 名词解释 细胞工程.生物工程.多能干细胞.继代培养.人工种子.看护培养.固定化培养.细胞两相培养.不对称融合.雄核发育. 二 填空 1 生物工程的六大组成:发酵工程.酶工程.蛋白质工程.基因工程.生物化学工程.细胞工程. 2 基因工程( ...