微生物实验考试重点

1．微生物的纯培养物由一种微生物组成的细胞群体通常是由一个单细胞生长繁殖形成。 2．菌落：单个微生物细胞在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度形成的肉眼可见的、有一定形态的子细胞生长群体。 3. 灭菌：是指物体中包括芽孢在内的所有微生物都被杀死或消除。

4. 消毒杀死或灭活物质或物体中所有病原微生物的措施消毒起到防止感染或传播作用 5.无菌技术：在分离、转接及培养纯种微生物时，防止其被环境中微生物污染或其自身污染环境的技术。

6. 鉴别培养基：在培养基中加入能与特定微生物的代谢产物发生特征性化学反应的化学物质，用于鉴别不同类型微生物。 7. 选择培养基：根据不同微生物的营养需求或对某种化学物质敏感性不同，在培养基中加入相应营养物质或化学物质，抑制不需要微生物的生长，将所需微生物从复杂的微生物群体中选择分离出来。

8. 基础培养基：含有一般微生物生长所需基本营养物质的培养基。

9. 合成培养基：由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，也称为化学限定培养基。 10. 平板划线法：用接种环在培养平板表面划线接种微生物，使微生物细胞数量随着划线次数的增加而减少，并逐步分开。保温培养后，在固体培养基表面得到生长分离的微生物菌落。

11. 稀释倒平板法：将待分离的材料稀释后与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后制成可能含菌的培养平板，保温培养后分离得到的微生物菌落生长在固体培养基表面和里面。

12．平板菌落计数法：将适当稀释的样品涂布于琼脂培养基表面，培养后活细胞能形成菌落，通过计算菌落数能知道样品中的活菌数，该方法称为平板计数或菌落计数。 二．填空题 （每空1分，共20分） 1. 用培养平板进行微生物纯培养分离的方法包括：平板划线分离法 / 稀释涂布平板法 、 稀释倒平板法。

2. 霉菌菌体均由分支或不分支的菌丝构成。许多菌丝交织在一起，称为菌丝体。在固体

培养基上，部分菌丝深入培养基内吸收养料，称为 营养菌丝体 ；另一部分则向空中生长，称为 气生菌丝体。有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成 子实体 。

3. 革兰氏阳性细菌细胞壁的主要成分为 肽聚糖 和 磷壁酸 ，而革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分则是 脂质 、肽聚糖、蛋白质、脂多糖 。

4. 设计配制培养基所需遵循的原则包括目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约/控制氧化还原电位、原料来源和无菌处理。 5. 常用的培养基凝固剂有： 琼脂、明胶、海藻酸胶 。

6. 按用途分，培养基可分为 鉴别培养基、营养培养基 、特殊培养基 和选择培养基。 7. 按所含成分划分培养基可分为 天然培养基 和 组合培养基 半组合培养基 。 8．在菌体形态观察中，需要进行制片后才能在显微镜下观察，观察细菌时采取的制片方法是 涂片法 ，观察放线菌时采取的制片方法是 插片法或玻璃纸法 ，观察真菌采取的制片方法是 美蓝染液水浸片法 或水-碘液浸片法 。

9．对细菌简单染色法一般步骤是染色、水洗、

干燥、镜检 常用的染料有 吕氏碱性美蓝 和 草酸铵结晶紫染液 等。

10．湿热灭菌法在常压下 蒸汽潜热大、穿透力强、 容易使蛋白质变性或凝固 。 11．每种微生物都有自己的最适宜的pH值和一定的pH适宜范围。大多数细菌的最适pH为 6.5-7.5 ，酵母菌和霉菌的最适pH范围为 6.0-6.5 ，放线菌的最适pH为 7.5-8.0 。

12．对玻璃器皿、金属用具等物品可用高压蒸汽灭菌法或干热灭菌法进行灭菌；而对于牛奶或其他液态食品一般采用超高温灭菌，其温度为 120 ℃，时间为 2-4s 。 13．革兰氏染色法是鉴别细菌的重要方法，染色的要点如下：先用草酸铵结晶紫初染，再加碘液媒染，使菌体着色，然后用 乙醇 脱色，最后用番红复染，呈 紫 色为革兰氏阳性反应，呈 红 色为革兰氏阴性反应。

三．选择题（每题1分，共10分）

1. 培养微生物的常用器具中，（A ）是专为培养微生物设计的。 A.平皿 B.试管 C.烧瓶 D.烧杯

2．对光学显微镜观察效果影响最大的是 （ B ）A 目镜 B 物镜 C 聚光器 D总放大倍数

3. 冷冻真空干燥法可以长期保藏微生物的原因是微生物处于（B ）环境，代谢水平大大降低。A. 干燥、缺氧、寡营养B. 低温、干燥、缺氧；C. 低温缺氧寡营养D.低温干燥寡营养

4．放线菌属于（B ） A 病毒界 B 原核原生生物界 C 真菌界 D 真核原生生界 5. 实验室培养细菌常用的培养基是（A ） A. 牛肉膏蛋白胨培养基

B. 马铃薯培

养基 C. 高氏一号培养基 D.查氏培养基 6．下面那一项不属于稀释倒平板法的缺点？（ A ）A菌落有时分布不够均匀B 热敏感菌易被烫死C 严格好氧菌因被固定在培养基中生长受到影响D 环境温度低时不宜操 7．微生物的分离方法中不包括（ B ）A稀释平板法 B 影印法 C 划线法 D 单细胞挑取法

8．为了测定饮料中的细菌数，下述哪种方法

最好？（ C ）A 比浊法 B 显微直接计数法 C 平板计数法 D 膜过滤法 9．制细菌标本片采取的制片方法是（B A水浸片B. 涂片法 C. 印片法D. 组织切片法 10．半固体培养基中，琼脂使用浓度（ B ）。 A、0 B、0.3—0.5% C、1.5—2.0% D、5% 11．接种环常用的灭菌方法（ A ）A火焰灭菌 B干热灭菌 C高压蒸汽灭菌 D间歇灭 12. 巴斯德消毒法可用于（ D）的消毒。 A. 啤酒 B.葡萄酒 C.牛奶 .以上所有 13. 只能用高压灭菌才能杀死的是（ C ） A. 结核分枝杆菌 B. 病毒 C.细菌的内生孢子 D.霉菌孢子

四、判断是非题（每题1分，共10分） 1．为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽并在使用前进行高温干热灭菌。（+ ） 2. 所有的微生物都能在固体培养基上生长，用固体培养基分离微生物的纯培养是最重要

的微生物学技术。（ + ）

3. 所有的培养基都是选择性培养基。（+ ） 4. 直接挑取在平板上形成的单菌落就可以获得微生物的纯培养。（+ ）

6．显微镜的放大倍数越高，其视野越大。（+ ） 7. 所有碳源物质既可以为微生物生长提供碳素来源，也可以提供能源。（ + ） 8．对含葡萄糖的培养基进行高压蒸汽灭菌时可在121.3加热20即可。 (+ )115℃ 35min 10. 基础培养基可用来培养所有类型的微生物。（ + ）可供大多数细菌生长

五．问答题（共6题，其中生物工程专业全做，食品科学工程专业做前4题，共50分） 1．试述革兰氏染色的步骤和机制。（8分） G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。2）草酸铵结晶紫染1分钟。3）自来水冲洗。4）加碘液覆盖涂面染1分钟。5）水洗，用吸水纸吸去水分。6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。7）蕃红染色液（稀）（或沙黄）染10秒钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

2．如果要从环境中分离得到能利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物，该如何设计实验？（10分） 将培养基所含的物质定位苯和其他不能提供能源和碳源的必需物质，在培养基上方应其他物质吸收二氧化碳 3 ．湿热灭菌比干热灭菌效率高的原因?（7分） 湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高， 4．试述显微镜直接法和平板菌落计数法的优缺点。（8分）

微生物显微镜直接计数法随机性大,所以对

菌体数量不能做出较为宏观,全面的反应.显微镜直接计数法一般与血球计数板配套使用.但显微镜直接计数法的优点是快速,观察到马上可以计数.平板菌落计数法最大的缺点是速度慢,需要平板上长出菌落一段时间后才能计数.但是由于平板菌落计数法通常做梯度稀释,所以计数的线性范围大.由于是菌悬液涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度.重复性,平行性很好,是经典的计数方法.

5．某学生利用酪素培养基平板筛选产细胞外蛋白酶细菌，在酪素培养基平板上发现有几株菌的菌落周围有蛋白质水解圈，是否能仅凭蛋白质水解圈与菌落直径比大，就断定该菌株产细胞外蛋白质能力就大，而将其选择为高产蛋白酶的菌种，为什么？（10分） 答：酪素： 微生物培养基的氨基酸氮源，由酪蛋白水解得到，常见商品名称为水解酪素或酶解酪素。酪蛋白水解后富含21种氨基酸，氨基酸种类齐全。 因此常用于制备培养基。 酪素培养基当然富含酪素。酪素 实质就是蛋白质片段，蛋白酶有不同的底物对象，专一性各有不同，有很多蛋白酶不能水解酪素，所以不形成蛋白水解圈。蛋白水解圈与菌落直径比大只能说明该种细菌该菌株产胞外的能够水解酪素的蛋白酶的能力大小，而不能仅此就判定该菌株产胞外蛋白酶的能力就大或选其为高产蛋白酶的菌种。 6.严格的无菌操作是一切微生物工作的基本要求，但在分离与培养极端嗜盐菌时常在没有点酒精灯的普通实验台上倾倒培养平板，在日常环境中直接打开皿盖观察和挑取菌落，而其研究结果并没有因此受到影响，这是为什么？在它们生存环境中耐受或需要高盐浓度，其他细菌不宜在该培养基生存。 7. 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。会造成更多的死细胞，在显微镜下观察，活的是透明无色，衰老的是淡蓝色，死亡的是蓝色，如果美蓝染色液作用时间过长，会造成细胞脱水死亡并渗透染液，影响实验结果。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈

代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。影响：会造成更多的死细胞，在显微镜下观察，活的是透明无色，衰老的是淡蓝色，死亡的是蓝色，如果美蓝染色液作用时间过长会造成细胞脱水死亡并渗透染液影响实验结果。 8. 为什么说95%酒精脱色是革兰氏染色的关键步骤？ 因为如果脱色过度，有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性如果脱色不够，有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性

9. 显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。（部分杆菌还可形成芽孢）放线菌：存在分枝丝状体和菌丝体，革兰氏阳性菌，有孢子丝和孢子（球形、椭圆形、杆状、柱状）。酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。菌体比细菌大几倍到几十倍，部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。霉菌：菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍到几十倍，在低倍镜下即可看到，并还可看到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等。 10. 简述配制培养基的基本步骤及注意事项。１培养基配方的选定 ２培养基的制备记录 ３培养基成分的称取 ４培养基各成份的混合和溶化 ５培养基pH的初步调正 ６培养基的过滤澄清 ７培养基的分装 ８培养基的灭菌 ９培养基的质量测试1培养基的保存