唾液淀粉酶生化实验
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验
小组成员:孙天纬 李敏媛 唐芳娇 蒋雅莉
实验目的:
1. 掌握设计性实验的基本思路,并完成设计报告。 2. 掌握唾液淀粉酶最适pH的测定原理和方法。 3. 熟悉影响酶促反应速度的因素。
实验原理:
1.酶促反应速度受到许多因素的影响,如温度、pH、激活剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响,可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉反应的颜色随产物的量的增加而加深的特点,来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色,颜色由蓝变黄,表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。
2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时,淀粉遇碘呈蓝色,经查阅文献,吸收波长位于660nm处。不同pH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同,吸光度值也不同。因此,通过测量660nm处的吸光度值,可以了解pH对酶促反应的影响,吸光度最小的溶液其pH即为唾液淀粉酶的最适pH。
实验步骤:
1.缓冲溶液的配制。取7支试管进行编号1-7,分别按下表加入试剂,再加蒸馏水稀释到10mL。
2.淀粉用量的确定用量:mL
*选择颜色最浅的一支试管
3.唾液的采集。
先给备取者一杯纯净水让其漱口,将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口,并做咀嚼运动,这时,备取者的唾液会不停地流出来。
4.唾液的稀释。取7支试管,进行编号1-7',进行稀释。
'
5.唾液稀释倍数的选取。
另取7支试管,分别编上A-G号,各取上述稀释的唾液各0.1ml,分别加入相应编号的试管里,向7支试管内同时加入0.1ml的2.5g/L的淀粉溶液和0.9mL的7.0pH缓冲液,振荡混匀后放入37 ℃恒温水浴7.5分钟后取出,滴加2碘液,振荡混匀,观察颜色,选取颜色变化适中的一支,记录稀释倍数。 结论:使用稀释10倍的唾液的试管的颜色适中。 6.最适pH的测定。
另取9支试管,进行编号,按下表加入试剂。进行测定。
7.结果分析
当在最适pH下反应时,淀粉被水解最完全,剩余最少,颜色最浅,吸光度最小,所以吸光度最小对应的pH为最适pH。
思考讨论:
1. 2.
参考文献
1.吴耀生主编.医学生物化学与分子生物学实验指南.北京:人民卫生出版社.2014
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