迷迭香提取物延缓衰老作用的研究_张泽生

生物工程

食品研究与开发

FoodResearchAndDevelopment

2012年3月第33卷第3期

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迷迭香提取物延缓衰老作用的研究

张泽生，温生萍，王浩，邵婵，胡莎

（天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457）

摘

要：探讨迷迭香提取物在延缓衰老方面的作用。给果蝇饲喂不同剂量（0、1、3、5mg/mL）的迷迭香提取物，利用果

蝇生存试验研究迷迭香提取物对果蝇寿命的影响，于30d测定果蝇超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）丙二醛（MDA）含量。结果表明各剂量组均能延长果蝇的寿命，并随着迷迭香提取物浓度的增大，在一定浓度范活性、

围呈剂量-效应关系。3mg/mL剂量组可显著提高果蝇体内SOD和CAT活力，降低MDA含量。迷迭香提取物可以提高果蝇体内抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化，具有延缓衰老的作用。关键词：迷迭香提取物；果蝇；寿命；抗氧化

StudyonAntisenescencePotentialofRosmarinusOfficinaliaExtractZHANGZe-sheng,WENSheng-ping,WANGHao,SHAOChan,HUSha

（InstituteofFoodEngineeringandBiotechnology,TianjinUniversityofScienceandTechnology,Tianjin300457,China）

Abstract：TostudytheeffectsofRosemaryextractondelayingaging.DrosophilawerekeptonthemediummadebyRosemaryextractwith4contentof0，1，3，5mg/mL.LongevitytestwerecarriedouttofindtheeffectsofRosemaryextractonthelifespan.Theactivityofsuperoxidedismutase(SOD),catalase(CAT)andthecontentofmaleicdiadehyde(MDA)weretestedafterbeingraisedfor30days.Everytestgroupsprolongthelifespanofdrosophila.WiththeincreaseofRosemaryextract,agingisdelayedinadose-responserelationship.3mg/mLtestgroupcouldsignificantlyincreasetheactivitiesofSODandCATanddecreaseMDAcontent.TheactivitiesofantioxidantenzymescouldbeenhancedandlipidperoxidecouldbeinhibitedbyRosemaryextract,whichmightbeoneofthereasonsforprolongingthelifespanofDrosophila.Keywords：Rosemaryextract;flies;lifespan;antioxidant

果蝇是一种真核多细胞生物，具有寿命短、繁殖高度纯种、饲养简便等优点，其代谢、生理状况等力强、

同哺乳动物基本相似[1]，英国科学家还发现果蝇有类似人类的衰老基因，因此常被用于衰老实验研究。

迷迭香（RosmarinusofficinalisL.）又名油安草，为唇

基金项目：国家高技术研究发展计划（863计划）资助项目（2007AA100401）

作者简介：张泽生（1956—），男（汉），教授，博士生导师，博士，主要从事食品科学与营养学的科研和教学工作。

形科迷迭香属多年生常绿小灌木植物[2]，迷迭香提取物是从迷迭香植物中提取的具有抗氧化活性的一系列物质的混合物，是一种高效天然抗氧化剂，主要成分是二萜酚类、黄酮类和少量的三萜类化合物[3]。研究表明迷迭香提抗炎、抗癌等多种活性，并且广泛应用取物有免疫调节、

但关于迷迭香提取物在延缓衰老方面报于食品工业中[4]。

道较少，因此，拟利用不同剂量的迷迭香提取物喂饲果蝇，研究迷迭香提取物对果蝇寿命及其抗氧化酶系统的影响，以期为迷迭香提取物抗衰老活性研究提供参考。

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张泽生，等：迷迭香提取物延缓衰老作用的研究

生物工程

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1材料与方法1.1

材料与仪器1.1.1材料

迷迭香提取物：天津尖峰有限公司提供；超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶（CAT）、丙二醛(MDA)、考马斯亮蓝测定试剂盒：南京建成生物工程研究所；其余试剂为国产分析纯或生化试剂。1.1.2仪器

DZKW-0-2电热恒温水浴锅：北京市永光明医疗仪器厂；BS224S电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；全波长酶标仪：伯乐公司；HWS-850智能恒温恒湿培养箱：宁波海曙赛福实验仪器厂；MR23i高速多功能冷冻离心机:法国JouanIndustriesS.A.S。1.2方法

1.2.1

实验动物培养

野生型Oregon品系黑腹果蝇，收集8h内羽化未交配的果蝇成虫，置于温度为25℃，相对湿度为60%～70%的恒温培养箱中饲养。本实验选用雄果蝇作为研究对象。1.2.2果蝇培养基的制备1.2.2.1

基础培养基

玉米粉72g，

葡萄糖72g，琼脂6g，干酵母粉10g，40mL75%乙醇（含0.1%对羟基苯甲酸乙酯），水750mL。

将琼脂与葡萄糖倒入锅内加水，加热煮沸使其充分溶解，用剩余水分别将玉米粉和干酵母粉调成糊状，将搅拌均匀的玉米糊倒入锅内煮至略带黏稠，加入酵母粉糊，充分搅拌，停火后加入40mL75%乙醇，搅拌均匀即可。1.2.2.2

样品培养基

称取一定量迷迭香提取物加到热的基础培养基中，配制成1、3、5mg/mL的样品培养基。1.2.3

果蝇生存试验

取2d龄雄果蝇随机分为4组，每组200只，分装于10管。对照组在基础培养基上培养；其余3组分别培养于1、

3、5mg/mL的迷迭香提取物培养基上，每3天更换一次新的培养基，并记录死亡数，直至果蝇全部死亡。最后统计半数死亡时间，平均寿命和最高寿命（最后死亡的20只果蝇存活天数的平均数）。1.2.4

果蝇总SOD活性、CAT活性、MDA含量的测定方法取2d龄雄果蝇随机分为4组，每组100只，分装于5管，

培养方法同生存试验。在第30天时首先将果蝇饥饿2h，然后用工业氮麻醉后称重，冻存于-80℃备用，测定果蝇体内抗氧化酶活和MDA含量。

每1管作为1个样本，加入一定量生理盐水配制

成2%的组织匀浆，

4℃、2500r/min离心10min后，取上清液测定果蝇总SOD活性、CAT活性、MDA含量和蛋白质含量。

果蝇SOD活性、CAT活性、MDA含量和蛋白质含量均用南京建成生物工程研究所试剂盒说明书的方法操作，在酶标仪上测定，每个反应样品均加3个酶标板孔，作为平行对照，每孔的加样量为200μL。

各实验组果蝇均测定5个样本。SOD活性(黄嘌呤氧化酶法)；

CAT活性(紫外分光光度法)；MDA含量(硫代巴比妥酸法)；总蛋白含量（考马斯亮兰法）。1.2.5

统计学方法

采用SPSS11.5统计软件处理，值以±s表示，不同实验组间均值差异用t检验。2结果与分析

2.1

迷迭香提取物对黑腹果蝇寿命的影响迷迭香提取物对果蝇寿命的影响，见表1。

表1迷迭香提取物对果蝇寿命的影响±s)

Table1EffectsofRosemaryextractonlife-spaninDrosophila组别半数死亡时间/d

平均寿命/d最高寿命/d对照组4849.04±7.0772.751mg/mL5454.74±4.73*77.403mg/mL5957.62±5.63**81.455mg/mL

52

53.78±5.26

76.35

注：与对照组相比*（P＜0.05）；**（P＜0.01）。

由表1可知，各剂量组果蝇的半数死亡时间、平均寿命、最高寿命均高于对照组。随着迷迭香提取物浓度的增大，果蝇寿命呈延长趋势，3mg/mL剂量组果蝇寿命均达到最高，继续增加培养基中迷迭香提取物含量时，果蝇寿命反而缩短。其中1mg/mL和3mg/mL剂量组平均寿命与对照组相比有显著性差异(P

果蝇生存曲线，见图1。

1001control%

753mg/mL5mg/mLmg/mL

/率活50存2500

[***********]066727884

时间/d

图1果蝇生存曲线

Fig.1Lifespancurveofwildtypeflies

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张泽生，等：迷迭香提取物延缓衰老作用的研究

从图1果蝇生存曲线可以看出，在雄果蝇生长的第30天后，

各剂量组果蝇存活率均高于对照组，尤其以3mg/mL剂量组果蝇生存曲线与对照组果蝇生存曲线差异明显。2.2迷迭香提取物对SOD、CAT、MDA的影响2.2.1

迷迭香提取物对MDA含量的影响迷迭香提取物对MDA含量的影响，见图2。

l

omn量

计）/1.5MDA含质白1.0A**

D蛋**

**

M克0.5毫每0.0

（以对照组

1mg/mL3mg/mL5mg/mL组别

图2迷迭香提取物对MDA含量的影响

Fig.2EffectsofRosemaryextractonMDAcontentinDrosophila

注：与对照组相比**（P

由图2可知，各剂量组的MDA含量均低于对照组，且有显著性差异（P＜0.01）。一定浓度范围内，果蝇体内MDA含量随着迷迭香提取物浓度增大而呈量效关系递减，其中3mg/mL剂量组果蝇的MDA含量最低。

2.2.2迷迭香提取物对SOD、CAT的影响

迷迭香提取物对CAT活性的影响，见图3；迷迭香提取物对SOD活性的影响，

见图4。25CAT

U

/计）质白蛋克毫20

力（以活TAC15

对照组

1mg/mL3mg/mL

5mg/mL

组别

图3迷迭香提取物对CAT活性的影响

Fig.3EffectsofRosemaryextractonCATactivityinDrosophila注：与对照组相比*（P＜0.05），**（P＜0.01）。

由图3可知，与对照组相比，各剂量组的CAT活性均高于对照组，但仅有3mg/mL剂量组有显著性差异（p＜0.01）

；由图4可知，各剂量组果蝇的SOD活性均高于对照组。与对照组相比，1mg/mL和3mg/mL剂量组有极显著差异（p＜0.01），5mg/mL剂量组有显著

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200USOD

计）/180质白160蛋克140**毫120力（以活100DO80S60

对照组

1mg/mL3mg/mL5mg/mL

组别

图4迷迭香提取物对SOD活性的影响

Fig.4EffectsofRosemaryextractonSODactivityinDrosophila注：与对照组相比*（P＜0.05），**（P＜0.01）。

性差异（P＜0.05）。由此可见一定量的迷迭香提取物可提高果蝇机体内源性抗氧化酶(SOD、CAT)的活性。3讨论

从果蝇生存试验可以看出，迷迭香提取物各剂量组均能延长果蝇的寿命，并随着迷迭香提取物浓度的增大，在一定浓度范围呈剂量-效应关系。5mg/mL剂量组果蝇的半数死亡时间、

平均寿命和最高寿命均低于其它两个剂量组，与对照组相比平均寿命无显著性差异。这可能跟迷迭香提取物有较大气味，影响果蝇摄入量有关；也可能是较高剂量的迷迭香提取物会产生一定毒性作用有关。

国内外研究表明，迷迭香提取物是一种高效天然抗氧化剂，其抗氧化组分主要有鼠尾草酚、鼠尾草酸、迷迭香酚、迷迭香酸[5]。王虹等研究发现迷迭香酸能提高抗氧化酶的活性，清除自由基，减少过氧化脂质的生成，起到延缓衰老的作用[6-7]。结果显示，喂饲迷迭香提取物30d后，1mg/mL和3mg/mL剂量组可显著提高

果蝇机体抗氧化酶活性，同时抑制脂质过氧化物MDA的产生，有效延缓衰老。由此推测迷迭香提取物延缓衰老的机制可能是由于迷迭香提取物中的抗氧化组分能够提高机体抗氧化酶活性，清除机体过量自由基，

维持自由基代谢的平衡，从而减少了自由基引起的生物膜脂质过氧化反应，保护机体的正常新陈代谢。参考文献：

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阿魏菇原生质体制备及再生条件的建立

周继阳，王勇，祝长青*

（新疆师范大学分子生物学与生物信息研究室，新疆乌鲁木齐830053）

摘

要：以新疆阿魏菇为材料，研究菌龄、酶解时间、酶解液对阿魏菇菌丝原生质体产量的影响，同时还研究了不同渗

透压稳定剂对原生质体再生的影响。结果显示，在0.6mol/LKCl稳渗剂条件下，菌龄为8d阿魏菇菌丝体（0.1g）（1.5%离析酶+0.5%纤维素酶+2%溶菌酶）制备原生质体，35℃酶解3h获得原生质体达在0.8mL混合酶解液中

5×106个/mL。原生质体再生结果显示，在0.8mol/L蔗糖稳渗剂下，原生质体再生时间为16d，其再生率可达0.6%。该文通过对阿魏菇原生质体分离和再生条件的研究，旨在从细胞水平上探索一条食用菌育种新途径，为发展和完善食用菌新菌株选育提供理论依据和技术借鉴。关键词：食用菌；原生质体；再生；渗透压稳定剂

TheEstablishmentSystemofPreparationandRegenerationofP.ferulaeLenziProtoplast

ZHOUJi-yang，WANGYong，ZHUChang-qin*

（ResearchDivisionofMolecularBiologyandInformatics,XinjiangNormalUniversity,Urumqi830053,Xinjiang,China）

Abstract：ThispaperfocusedonthepreparationandregenerationofP.ferulaeLenziprotoplast.The0.1gmyceliumwasaddedinto0.8mLenzymesolutioncontaining1.5%segregationenzyme,0.5%cellulaseenzyme,2%lysozymeand0.6mol/LKClasosmoticstabitizer,whichhadbeenculturedinliquidPDAmediumfor8days.Thesemyceliumwastreated3hunder35℃andthenumberofprotoplastreachedto5×106.Thefrequencyofprotoplastregenerationcanreachupto0.6%byculturedonPDAmediumfor16dwith0.8mol/Lsucroseasosmoticstabitizer.Thepurportofthispaperwastoexploreanewwaytoediblefungibreedingatcellularlevelandprovidethetheoreticalbasisandtechnicalreferenceforthedevelopmentandimprovementofediblefungibreeding.

Keywords：ediblefungi;protoplast;regeneration;osmoticstabilizer

阿魏菇，准噶尔阿魏侧耳[P.ferulaeLenzi][1]（图力2001），因野生寄生或腐生在中药阿魏肥古尔和李玉，

大的根茎部，而得俗名阿魏菇，属真菌门，担子菌亚门，

基金项目：国家自然科学基金项目(No.30960044)

作者简介：周继阳（1985—）,男（汉），硕士研究生，主要研究方向：植物分子生物学。*通信作者

担子菌纲，伞菌目，口蘑科，侧耳属。因其味道鲜美，口味独特，被美誉为食用菌皇后。但因野生的阿魏菇数量极少，加之人工栽培困难，无法满足人们的需求。因此，阿魏菇的规模化栽培前景十分广阔。

本文以本地人工栽培的阿魏菇为材料，研究影响阿魏菇原生质体分离及再生的因素，使原生质体的产量和再生率均达到较高水平，为以后进行菌种选育和遗传研究奠定基础。

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收稿日期：2011-07-06

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