葛根总黄酮提取工艺条件的研究

第22卷第12期

Vol. 22No. 12

徐州工程学院学报2007年12月DEC 1

2007

Jo ur nal of Xuzhou Institute of Techn ology

葛根总黄酮提取工艺条件的研究

汪友明1, 陈宏伟2, 田　超1

(1. 安徽农业大学, 　安徽　合肥　230036; 　2. 徐州工程学院, 　江苏　徐州　221008)

　　【摘　要】　通过正交试验, 研究了葛根总黄酮的提取工艺; 以葛根总黄酮的提取量为指标, 考

察了乙醇浓度、溶媒量、提取时间、提取次数4个因素. 结果表明葛根总黄酮的最佳提取工艺条件为A 1B 2C 2D 1, 即以原材料8倍量的60%乙醇, 提取3次, 每次1. 5h.

【关键词】　野葛根; 葛根总黄酮; 正交试验; 提取工艺

【中图分类号】　R282. 71　【文献标识码】A 【文章编号】167320704(2007) 1220024203

葛根总黄酮的提取方法很多, 如醇回流法、醇渗漉法、浸渍法、超声辅助萃取法等, 各有特点. 醇回流法生产周期短、成本低、辅助或无效成分的浸出较多, 故干浸膏得率高, 但异黄酮含量低. 醇渗漉法生产周期长、溶剂用量大, 故干浸膏得率不高, 但浸膏中的异黄酮含量高, 操作简便. 浸渍法生产周期长、溶剂用量较大, 干浸膏得率、异黄酮含量介于回流法与渗漉法之间. 浸渍法一般是同时提取葛根淀粉和异黄酮时才用. 与传统方法相比, 超声辅助萃取法溶剂用量减少, 萃取时间缩短, 但干浸膏的得率有所下降, 且难以实现产业化生产. 本文采用醇回流法, 以葛根总黄酮提取量为指标, 用L 9(34) 正交表筛选葛根最佳提取工艺, 并以大孔吸附树脂分离葛根总黄酮[1,2,3].

1　实验材料

1. 1　材料与试剂　野葛根购于合肥市医药公司, 盐酸、乙醇、氯仿、甲醇等均为分析纯;D 101. 大孔吸附树脂(天津农药股份有限公司) ; 葛根素对照品来自中国药品生物制品检定所(批号:753-200007) . 1. 2　仪器　8453-紫外可见分光光度计(美国惠普公司) ; KP -48型三用石英紫外线检测仪(北京科普) .

2　方法和结果

2. 1　正交试验设计　正交试验方案根据单因素初筛试验结果, 分别确定提取溶媒(乙醇) 浓度, 溶媒用量, 提取时间及提取次数为试验因素, 每个因素备选了3个水平, 设计正交表L9(34) , 各因素、水平见表1.

表1　实验因素及水平表

Table 1　Factor s and levels of ort hogonal experiment

水平

123

A

B

C

D

乙醇浓度(%)

60%乙醇70%乙醇80%乙醇溶媒量6倍8倍10倍

提取时间(h)

11. 52

提取次数

321

2. 2　葛根总黄酮的提取、分离　称取干燥葛根饮片100g , 按正交表进行回流提取、过滤、回收乙醇、浓缩得浓缩液, 加浓HCl 调p H1～2呈酸性溶液(备用液) .

取大孔吸附树脂(D 101) 约300g , 湿法装柱. 将备用液上柱, 水洗至中性, 用70%乙醇洗脱, 至薄层检测洗脱液无斑点止, 洗脱液减压回收乙醇、浓缩, 浓缩液水浴蒸干,80℃干燥得葛根总黄酮, 结果见表2.

收稿日期:2007210222

作者简介:汪友明(19772) , 男, 安徽桐城人, 硕士, 主要从事新药开发和化学方面研究.

表2　正交试验结果表

Ta ble 2　Design a nd result of or thogonal experime nt

编号

123456789

A [1**********]. 320. 619. 03. 3

B [1**********]. 520. 620. 80. 3

C [1**********]. 320. 621. 00. 7

D [1**********]. 521. 817. 64. 9

总黄酮量(g )

7. 97. 86. 45. 87. 67. 26. 85. 27. 0

葛根素含量(%)

66. 768. 580. 482. 164. 767. 968. 483. 068. 2

Ⅰ

ⅡⅢ

R

以因素B 为误差因素进行方差分析, 因素A 和因素D 对葛根总黄酮的提取量有显著意义, 因素C 对其明显影响. 结果见表3.

表3　正交设计方差分析表

Ta ble 3　Variance analysis of the or thogonal experiment

方差来源

A C D

离差平方和

1. 810. 084. 720. 02

自由度

2222

均方和

0. 900. 042. 360. 01

F 90. 04. 0236. 0

显著性

P 0. 05P

(B )

　　　　　F 0. 01(2,2) =99. 0　　F 0. 05(2,2) =19. 0

2. 3　总黄酮含量的测定

2. 3. 1　吸收波长的确定　称取葛根素适量, 置50ml 容量瓶中, 加95%乙醇5ml 溶解, 加入水稀释至刻度.

以95%乙醇1ml 加蒸馏水至10ml 溶剂作空白对照, 在200～400nm 波长处扫描, 结果在250nm 处有最大吸收, 结果见图

1.

图1　葛根素紫外吸收扫描图谱

Fig. 1　UV -spectrogr am of pue rarin

2. 3. 2　标准曲线的制备　精密称取干燥至恒重的葛根素20m g , 置50ml 容量瓶中, 加95%乙醇溶解并稀释

至刻度(对照液) . 精密吸取0. 5、、11. 5、、22. 5、3. 0ml 置于50ml 容量瓶中, 分别加入95%乙醇5ml , 摇匀, 再加入蒸馏水至刻度. 以95%乙醇1ml 加蒸馏水至10ml 溶剂作空白对照, 于250nm 处测定吸收度, 以浓度C

值与吸光度A 值线性回归, 拟合标准曲线, 标准曲线方程为C =0. 0703+10. 6986曲线见图

2.

A (r =0. 9991) , 其标准

2. 3. 3　样品含量的测定　分别称取干燥样品约12mg , 置50ml 容量瓶中, 加入95%乙醇5ml 溶解, 再加入蒸馏水至刻度, 摇匀. 以95%乙醇1ml 加蒸馏水至10ml 溶剂作空白对照, 于250nm 处测定吸收度. 根据工作曲线计算出葛根素的含量, 结果见图2.

2. 3. 4　薄层及紫外光谱定性　称取分离出的葛根总黄酮约20mg , 置50ml 容量瓶中, 加入95%乙醇溶解并稀释至刻度, 摇匀成样品液. 取4μl 点样于硅胶薄层板, 并以葛根素对照液为阳性对照, 在氯仿∶甲醇∶水(7.2∶2. 5∶0. 25) 展开剂展开,365nm 紫外线检测仪下显相同蓝色斑点.

取葛根素对照液及样品测定液在200～400nm 波长处扫描,250nm 波长处均有最大吸收, 结果见图3.

3　讨论

3. 1　有关葛根提取工艺的研究已有过, 本实验采用乙醇回流提取法, 以正交试验设计法安排实验, 全面考察了影响提取的4大因素, 且在3个水平上进行了考察, 从而确定了葛根最佳提取工艺条件.

3. 2　从表2的R 值可知, 因素B 对葛根总黄酮的提取量无明显影响, 以此为误差因素进行方差分析, 因素A 和因素D 对葛根总黄酮的提取量有显著意义, 因素C 对其无明显影响. 因此, 最佳提取工艺可选择为A 1B 2C 2D 1.

3. 3　大孔吸附树脂分离葛根总黄酮, 在洗脱过程中, 曾以60%、70%、80%乙醇为洗脱液进行洗脱, 表明以70%乙醇洗脱液用量少, 洗脱效果较好, 与文献报道一致[4].

3. 4　本实验采用以葛根素为标准品, 用紫外分光光度法测定葛根总黄酮含量方法可行且操作简单. 紫外扫描定性图谱表明样品图谱与葛根素对照品基本一致.

参　考　文　献

[1]郭建平, 孙其荣, 周全等. 葛根素总黄酮不同工艺的探讨[J].中草药,1995,26(10):522.[2]韦理象, 洪小军, 庄林芳. 葛根中葛根素提取工艺的优化[J].中草药, 2003, 34(9) :812.

[3]Jona tha n Lebeau , Christop he Fur ma n , et al. Antioxida nt P ropertie s of Di -tert -butyl hydroxyla ted Flavonoids [J ].Free

Radical Biology and Me dicine , 2000,29(9):900-902.

[4]崔九成, 蒙跃龙, 杨钧. 大孔树脂分离葛根总黄酮研究[J].西北药学杂志,1999,14(4):154.

(下转第36页)

参　考　文　献

[1]阳宪惠. 现场总线技术及其应用[M ]1北京:清华大学出版社,1999.

[2]严法高, 陈虹, 许慧. 基于现场总线的电梯监控系统的设计[J]1微计算机信息,2005,21(6):85-87.

Design of the Elevator Contr ol System B a sed on CC -L in k

GUO Bao 2ni ng

(Ji an gsu Marit ime Insti t ute , Nanji ng 211170, China )

【Abstract 】　Elevator co nt rol system based on CC -Link is i nt roduce d i n t hi s paper. We li nked invert 2er to PL C t hrough CC -Li nk to for m a net work while connecti ng upper comp ut er wi t h PL C t hrough RS -232i nt erface. B y reasonable selection and desi gn t he capa bili t y of elevator cont rol i s enhanced and t he de 2gree of comfort duri ng elevator runni ng is improved to a comparati vel y ideal l evel. 【K ey w or ds 】　CC -link ; el evat or cont rol ; system de si gn ; inverter

(责任编辑　崔思荣)

(上接第26页)

Study on Extr acting Technology Condition of Flavonoids f r om Puerar ia

WAN G Y ou 2mi ng 1,C HEN G Hong 2wei 2TIAN Chao 1

(1.Anh ui Agricul t ural Universit y , Hefei 230036, China ; 2. Xuzhou Inst it ut e of Technol ogy , Xuzho u 221008, China)

【Abstra ct 】　Through ort hogonal experi ment , t hi s paper st udies t he ext ract ion process of total flavone from pueraria. Wit h t he content of t he total flavone a s t he index , fo ur factors are t aken i nto consi deration :alcohol concent rat io n , quantit y , ext ract ing duration , and ti mes of ext raction. The result show s t hat t he i 2deal ext raction condi tions is A1B 2C2D1, t hat i s , 60%alcohol as solvent which a mount s to 8t imes of raw ma terial , 3t imes of ext raction a nd 1. 5h per ti me.

【K ey w or ds 】　puerari ae ;flavo noid ;ort hogonal experiment ;e xt raction t echnique

(责任编辑　崔思荣)