实习六 食品中人工合成色素的测定

实习六 食品中人工合成色素的测定

（一）原理

聚酰胺是一种高分子化合物，又称“尼龙6”，在酸性条件下可与水容性酸性染料牢固结合；在碱性条件下则可解吸色素，用纸层析法或薄层层析法进行分离鉴别后，再与标准比较予以定性、定量。

（二）试剂

1． 聚酰胺粉（尼龙6）200目

2． 正丁醇

3． 无水乙醇

4． 1%氨溶液

5． 乙醇-氨液（9：1）

6． 20%柠檬酸

7． 0.1%色素标准贮备液(1mg/ml):精确称取商品色素胭脂红、苋菜红0.1克容于蒸馏水，稀释至100毫升。

8． 展开剂（临用现配）正丁醇：无水乙醇：1%氨水（6：2：3）

（三）仪器

9． 沙氏漏斗-G3

10．抽滤瓶：500ml

11．100 ml， 500 ml

12．血红蛋白吸管

13．展开缸

14．玻璃水泵

15．带塞刻度比色管：10 ml

16．恒温水浴

17．量筒：25 ml， 50 ml

18．天平

19．吹风机

20．吸管：1 ml

21．白瓷蒸发皿

22．中速层吸滤纸

23．温度计

24．PH 试纸

25．玻璃棒

26．滴管

(四) 操作方法

1. 样品处理（汽水类样品）：将样品用两个杯子反复倾倒100次除去CO 2，精确吸取样

品50 ml放入100 ml烧杯中，加热到70℃，备用。

2．吸附去杂质：称取聚酰氨粉1g ，加少量水调成糊状后倒入前处理的70℃的样品中，充分搅拌使样液色素全部被吸附，将样液全部移入沙氏-G3漏斗抽滤，用300ml 70℃ PH=4的蒸馏水分多次洗涤沉淀物，至洗液与原蒸馏水PH 相同为止（洗涤过程必须充分搅拌，使所用的洗涤液与聚酰氨粉充分接触）。

3. 解吸: 用乙醇氨溶液15mlf 分三次洗涤色素，解吸过程时时搅拌直至滤出液无色为止并收集全部解吸液。

4．浓缩: 将色素解吸液置于蒸发皿中在80℃水浴上浓缩至0.5-1ml ，转入10ml 刻度试管中，用少量50%乙醇洗涤蒸发皿，洗液并入并入刻度试管中。

5纸层析定性:为了判断样品中存在有几种色素以及是什么色素，必须进行纸层析进行鉴定。经上述浓缩后样品色素溶液于新华中速层析滤纸（8cm*16cm）距底边2cm 的基线上点样点样点的直径应不超过2毫米为宜，样点间距离以及左右纸边各距2厘米。点样量20微升，同时根据样品颜色点上色素标准溶液点作对照。用展开剂在展开槽展开（展开前层析缸及滤纸先用相应的溶剂系统平衡10分钟后再展开）。待溶剂前沿到达离起始线12cm 处，将滤纸取出于空气中晾干，测量各色素点的R f 值，于标准色素R f 值对照确定何种色素（以标

准色素斑点R f 值衡量样品各色素斑点的R f 值是否于标准点在同一条直线上，色素的颜色是

否完全一致，就可确定样品色素属于何种色素）。

Rf （比移值）=斑点移动距离/溶剂前沿距离

所使用的展开剂有：

1) 正丁醇︰无水乙醇︰1%氨水 = 6︰2︰3

2) 正丁醇︰吡啶︰1%氨水 = 6︰3︰4

3) 异丁醇︰无水乙醇︰水 = 3︰2︰2

6．纸层析定量：将纸色谱的条状色斑剪下，用少量热水洗涤数次，洗液移入10ml 比色管中，并加水稀释至刻度，作比色测定用。

分别吸取0.0 0.1 0.2 0.3 0.4ml胭脂红或苋菜红色素标准液分别置于10ml 比色管中，各加水稀释至刻度。目视比色。

（五）结果计算

X（g/kg，g/L）=A/（m*V2/V1）

式中 A：测定样液中色素的含量（mg ）

m ：样品质量或体积（g ，ml ）

V 1：样品解吸后总体积（ml ）

V 2：样液点纸体积（ml ）