甲醛滴定法测定氨基酸含量
实验4 甲醛滴定法测定氨基酸含量
一、目的
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
二、原理
水溶液中的氨基酸为兼性离子,因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合,形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物,使N+H3上的H+游离出来,这样就可以用碱滴定N+H3放出H+,测出氨基氮,从而计算氨基酸的含量。
若样品中只含有单一的已知氨基酸,则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸(如蛋白质水解液),测不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸与甲醛作用后,生成的化合物不稳定,导致滴定后结果偏低;酪氨酸含酚基结构,导致滴定结果偏高。
三、材料、试剂与器具
(一)试剂
1、0.5%酚酞酒精溶液
称0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴麝香草酚蓝溶液
取0.05溴麝行草酚蓝溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%甘氨酸溶液
取1g甘氨酸溶于100ml蒸馏水。
4、标准0.100mol/L 氢氧化钠溶液
5、中性甲本醛溶液
取甲醛溶液50ml,加0.5%酚酞指示剂约3ml,滴加0.1mol/LnaOH溶液,使溶液呈微粉红色,临用前中和。
(二)实验器具
1、锥形瓶 2、碱式滴定管
1、 移液管洗耳球 4、天平
5、容量瓶 6、试剂瓶
7、量筒 8、玻棒与烧杯
四、操作步骤
2、混匀后用标准0.100mol/L氢氧化钠溶液滴定至紫色(pH8.7~9.0)
3、结果计算
每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
mg=(V1-V2)⨯1.4008 2
式中:V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积(ml);
V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积(ml);
1.4008 为1ml 0.1mol/L氢氧化溶液相当的氮量(mg)
五、注意事项
利用甲醛滴淀法可以用来测定蛋白质的水解程度。随着蛋白质水解度的增加,滴定值也增加,当蛋白质水解完成后,滴定值不再增加。
六、实验报告
根据滴定结果,总结分析此法在实际应用中的优缺点。,
七、思考题
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么/
2、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N+H3基上的H+,不能用一般的酸碱指示剂?
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